动物繁殖学第16讲胚胎移植 体外受精 显微受精.ppt

华中农业大学动科动医学院 第十章 第一节 胚胎移植 一、概 况 二、胚胎收集 三、胚胎分割 四、胚胎冷冻 五、胚胎克隆 六、胚胎移植 第三节 显微受精技术 sperm micro-injection 一、显微受精对象 常规体外受精不成功 精子数目少：＜1×106/ml 弱精子，缺乏活动 免疫性不育 阻塞性无精子症 畸形精子 透明带硬化 二、显微受精的意义 提高珍贵品种精子的利用率 推动精子分离技术的推广应用 提高IVM卵母细胞的受精率 解决无精和少精的雄性生育问题 简化转基因的方法 三、显微受精方法概述 卵子的收集和处理 精子或精核的制备 精子或精核的显微注射 卵子的激活 四、显微受精种类 透明带钻孔法 （zona drilling，ZD） 部分透明带切割法 （partial zona dissection PZD） 蛋白水解酶（糜蛋白酶）处理透明带 将卵放入精子培养液中 精子通过溶解处进入卵 用玻璃针等机械方法刺破透明带（同上） 出现的问题 多精受精 胚胎移植 采集良种母牛的卵母细胞 卵母细胞的体外培养 采集良种公牛精子 精子体外获能 体外受精 良种牛体外受精胚胎 受体牛 良种犊牛 成熟期牛 屠宰加工厂 市场 采集卵巢中的卵母细胞 “试管牛”工厂化生产的技术流程图 1982年世界首例试管牛犊问世 实现良种牛快速大量繁殖首先要做的是 和 的培养。 体外受精 早期胚胎 主要包括 、 和 等几个主要步骤 。 概念：采取雌性动物的 和雄性动物的 ，使其在 中受精。 二、体外受精 卵细胞 精子 试管 卵细胞的采集 精子的获取 受精 1.卵母细胞的采集和培养 对不同动物,采集卵母细胞的方法不同。 实验动物如小鼠、兔，以及家畜猪、羊等卵细胞的采集： 最常用的方法是卵巢经过 处理，具体做法是给供体注射 ，使一头母畜一次排出比自然情况下多几倍到十几倍的卵子，之后从 中冲取卵子，直接与获能的精子在体外受精。 超数排卵 促性腺激素 输卵管 大家畜或大型动物，如牛，卵细胞的采集： 从屠宰场已屠宰母畜的 中采集卵母细胞，也可以借助 、 或 等工具确定卵泡位置，直接从活体动物中吸取泡卵液（连同卵母细胞）取出，在体外进行人工培养，使其成熟。 卵巢 超声波(B超)探测仪 内窥镜 腹腔镜 牛卵巢 B超活采仪 B超引导法： 借助超声波探头和屏幕的引导，从活母畜卵巢采集卵母细胞。操作员先将带有超声波探头和采卵针的采卵器通过阴道插入子宫，同时通过将卵巢贴在探头上。根据B超屏幕所显示的卵泡位置，利用采卵针穿刺卵泡并同时抽吸卵母细胞。 活体采集的牛卵母细胞 卵母细胞的成熟培养：CO2培养箱 培养箱 培养箱 2.精子的收集和获能 收集精子的方法有： 假阴道法 手握法 电刺激法 在体外受精前，要对精子进行获能处理。通常采用的体外获能方法有 和 两种。 对于 、 和 的精子，一般采用培养法；对于 、 等家畜的精子常用化学法。 培养法：精子在获能液中获能。 化学诱导法：精子一定浓度的肝素或钙离子载体A23187溶液中，用化学药物诱导获能。 培养法 化学诱导法 啮齿动物 家兔 猪 牛 羊 3.受精 获能的精子和培养成熟的卵子，一般情况下在 或 中完成受精过程。 获能溶液 专用受精溶液 三、胚胎的早期培养 概念：是应用人工创造条件，对获取的 进行体外培养。 培养液成分：水、无机盐、糖类、维生素、氨基酸、激素、核苷酸、血清等 早期胚胎 不同动物胚胎移植时间不同 牛、羊：桑椹胚或囊胚阶段 小鼠、家兔：卵裂期或囊胚阶段 试管婴儿：8个或16个细胞阶段 胚胎培养发育到适宜阶段时，可将其取出向受体移植或冷冻保存。 显微授精（microinsemination，MI）也称显微受精（microfertilization，MF），是20世纪80年代发展起来的一种新型的IVF技术，是借助显微操作仪将精子或精子细胞直接注入卵母细胞质内（卵胞质内受精，intracytoplasmic sperm injection