人端粒酶催化亚基反义RNA重组腺病毒载体的构建与鉴定的开题报告.docx

人端粒酶催化亚基反义RNA重组腺病毒载体的构建与鉴定的开题报告

开题报告

一、选题背景及意义

端粒酶是一种参与维持染色体稳定的酶，其主要功能是在染色体末端修饰端粒结构，从而防止染色体末端因为反复复制而导致的短缩现象。端粒酶是由多个基因编码的复合物，其中催化亚基对于端粒酶的活性起关键作用。研究表明，端粒酶在许多肿瘤中起着重要作用，其活性水平与癌症的发生和进展密切相关。因此，寻找端粒酶抑制剂或者在肿瘤治疗中利用端粒酶的抑制作用，已成为了癌症治疗研究的热点之一。

反义RNA（RNAi）技术是一种重要的基因沉默技术，能够干扰特定基因的翻译和表达，从而探究基因的功能，并具有很大的应用前景。在癌症治疗中，反义RNA技术可以针对癌细胞的具体基因进行干扰，从而达到抑制癌细胞生长和增殖的目的。现有的研究表明，端粒酶催化亚基（TERT）是癌症的主要靶点之一，使用反义RNA干扰TERT的表达可以抑制癌细胞的增殖，并促进其凋亡，具有很大的治疗潜力。

腺病毒载体是一种广泛应用于基因转移和基因治疗的病毒载体，具有优秀的基因转染效率和生物安全性，并且能够转染包括静脉注射和局部注射在内的各种途径。端粒酶TERT的反义RNA可以通过腺病毒载体转入癌细胞中，实现针对TERT的基因沉默，从而发挥治疗作用。因此，构建反义RNA重组腺病毒载体，具有重要的基础研究和临床应用价值。

二、研究内容

本项研究将使用基因克隆技术和分子生物学技术，针对端粒酶催化亚基TERT进行反义RNA序列的设计，构建反义RNA重组腺病毒载体，并对其进行鉴定。具体内容包括以下几个方面：

1.端粒酶TERT基因的克隆与表达

通过PCR扩增方法，克隆目的基因TERT，并将其插入重组载体中，构建TERT的表达载体。

2.TERT反义RNA序列的设计和合成

通过bioinformatics软件对端粒酶TERT基因进行分析和预测，设计端粒酶TERT反义RNA序列，并进行反义RNA合成。

3.反义RNA重组腺病毒载体的构建

将TERT反义RNA序列克隆到腺病毒载体的适当位置，构建反义RNA重组腺病毒载体。

4.反义RNA重组腺病毒载体的鉴定

通过PCR扩增、Westernblot、实时荧光定量PCR等多种方法对反义RNA重组腺病毒载体的构建和鉴定进行评价。

三、研究预期结果及意义

通过本项研究，将成功构建端粒酶TERT反义RNA重组腺病毒载体，并对其进行鉴定。该项研究对进一步深入探究端粒酶在癌症中的作用机制、寻找新的癌症治疗方法、以及开发安全有效的基因治疗手段有着重要的意义。