第五章 生物制品制.ppt

第五章 生物制品制造新技术 主要讲一些生物制品中一些新疫苗、新诊断剂及抗体的概念及原理。 第一节 基因工程疫苗 指DNA重组技术研制的疫苗，包括将保护性抗原基因在原核细胞或真核细胞中表达的重组亚单位疫苗；及病毒或细菌的活载体疫苗，基因缺失疫苗，DNA疫苗等。 一、重组亚单位疫苗 将编码微生物保护性抗原的基因导入到原核细胞或真核细胞，使其表达分泌性保护性多肽抗原，加佐剂而成。 优点：A、安全、无病原性，无热源质和负作用。 B、可用于不好培养的微生物疫苗制备（圆环病毒、附红细胞体）。 缺点：研究困难，价格贵。 已经生产的有：口蹄疫多肽疫苗，炭疽三联毒素，疱疹病毒亚单位疫苗，激素亚单位疫苗（生长抑制激素14肽）。 二、重组活体载体疫苗 将保护性抗原基因转移到活载体中表达的活疫苗。理想的载体是弱毒疫苗病毒和疫苗细菌，病毒有痘病毒，腺病毒，疱疹病毒等。 一般大病毒做载体可以插入25kb的基因，小病毒仅插入2kb，故大病毒可插入多种保护性抗原基因，制成多价疫苗。 非复制性疫苗（称活-死疫苗）：载体病毒半复制，无排毒危险，但可以表达目的抗原。如金丝雀痘病毒可表达新城疫HF基因。 重组载体病毒活疫苗：鸡痘病毒可表达多种病毒的保护性抗原基因。 重组载体细菌活疫苗：如卡介苗，沙门氏菌，李氏杆菌等载体。 三、基因缺失疫苗 切除病毒强毒基因而制成的活疫苗，如切除伪狂犬病毒TK基因，其次还有自然缺失弱毒疫苗，如Barth-k61，以及双基因缺失gG,gE，有利于区别野毒抗体。 基因添加疫苗：插入基因，使微生物变异为弱毒疫苗，也可能是插入破坏病原基因作用。 第二节 诊断制剂 疫病诊断最重要，新型诊断试剂开发，弥补了临床诊断的不足。 一、重组表达抗原 是制备出高纯度的诊断抗原方法。步骤：将编码特定抗原的基因插入质粒，再转入宿主细胞表达，然后提取出来做诊断抗原。 二、核酸图谱分析 将被测核酸提取、切割、酶切、电泳等方法，进行分析诊断。有核酸电泳图谱；核酸酶切图谱、寡核苷酸指纹图谱等 三、核酸探针 用已知核酸片段同位素标记为核酸探针，与样品核酸杂交（互补结合），然后检测互补双链中有效放射同位素。 四、聚合酶链反应（PCR） 是DNA体外扩增技术：以单链DNA为模板，在DNA聚合酶作用下,在引物上不断延伸，加入有4种碱基（dNTP—三磷酸脱氧核苷酸），不断互补成DNA双链，然后高温解链—降温退火—延伸，试验不断反复，DNA 扩增数百万倍，然后电泳来诊断。 五、基因芯片 也叫DNA芯片，是指将许多特定寡核苷酸片段作为探针，有规律排列固定在支撑物上，加检测标本，相同DNA会结合成双链（双链吸收光谱和单链不一样），然后用激光共聚焦荧光检测系统，对芯片扫描，记录分析。 第三节 抗体工程技术 一、单克隆抗体 （一）概念：具有产生抗体的B细胞与骨髓瘤细胞杂交融合，产生杂交瘤细胞，无限生长，并产生大量单一抗体。 （二）单抗与多抗不同 单抗高特异，高纯度，均质，效价高，可大量生产。多抗相反。 （三）杂交瘤制备单抗过程 B细胞：提取抗原—免疫小白鼠—取脾脏的B细胞。 骨髓瘤细胞：为缺乏次黄嘌（H）鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT）。缺乏该酶，DNA合成旁路不通。 HAT选择培养基（H-次黄嘌呤,A-氨基喋呤，T-胸腺嘧啶）：阻断DNA合成正常路线，A起阻断作用，在此培养基上，DNA不能正常合成。走旁路，骨髓瘤缺乏HGPRT酶；B细胞不缺乏HGPRT，但是仅生存5代内，只有两者结合成杂交瘤，才可以无限生长，并不断产生抗体。 单抗的生产： 动物体内生产：小白鼠腹水生产。 细胞培养生产。