辣椒遗传转化体系的优化及转录因子JERF-33＃导入的分析.pdf

辣椒遗传转化体系的优化及转录因 子JERF-33#导入的研究 摘要 辣椒(CapsYc蚴a加u锄L．)是一种非常重要的蔬菜作物。但由于各种生物或 非生物胁迫，辣椒产量和品质受到严重的影响。因此，提高其综合抗性已成为重 要的研究课题。 为提高辣椒的抗性，可将抗病或抗逆基因导入辣椒中，但在植物中，抗病性 和抗逆性往往受不同基因所控制。因此，导入单个抗病或抗逆的功能基因，辣椒 的综合抗性难以得到改良，而同时克隆抗病抗逆基因又费时费力。其中编码转录 因子的基因，由于其DNA结合蛋白的特殊调控特性，可以使一个或多个基因同时 表达。将转录因子基因导入辣椒中，与只导入单个功能基因相比，对辣椒综合抗 性的改良具有更为重要的意义。 从番茄cDNA表达文库中分离到的．酚麟基因属于AP2／El{EBP转录因子家 族，此类型转录因子中包含一个保守的60个氨基酸左右的DNA结合域，能和GCC 盒相互作用，调控抗病、抗逆相关基因的表达。本试验旨在将脚-33#基因导 入辣椒中，以提高辣椒的综合抗性。 要将JE舻-33#基因导入辣椒中，首先必须建立一个稳定的遗传转化体系。 而辣椒基因工程发展的最大障碍是遗传转化率太低。本研究以三个甜(辣)椒品种 为试材，通过导入报告基因一绿色荧光蛋白基因，分别就农杆菌悬浮培养基的 pH值、共培养添加物、共培养时间和温度对外源基因导入的影响进行了较为系 统而深入的研究，建立起农杆菌介导的辣椒遗传转化体系。本研究结果表明： (1)农杆菌悬浮培养基pH为5．2时最有利农杆菌转化。 u (2)农杆菌共培养培养基中添加AS200M时，抗性愈伤组织荧光表达率最高。 (3)22℃时共培养，农杆菌转化率最高。 (4)共培养4天最有利于农杆菌的转化。 在此基础上，建立起了优化的辣椒遗传转化体系，并利用此体系，首次将 JE舻-33#转录因子基因导入辣椒中，通过PCR检测，获得转基因成株18株。 【关键词】辣椒；转录因子；绿色荧光蛋白；农杆菌；转基因 on of annuum L．) StudyImprovementPepper(Capsicum of andIntroduction Transformation Genetic System JERF-33#into Factor Pepper Transcription Abstract bioticstresscalldo most and isoneofthe importantvegetables．Abiotic Pepper their this studies to decrease and harm yield reason，many pepper,and quality．For onto its resistance． have carried being improvesynthetic