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实验一 光学显微镜的使用与微生物观察 实验一光学显微镜的使用与微生物观察 第一节普通光学显微镜的使用I.实验目的 1、了解普通光学显微镜的基本构造和工作原理。 2.学习和掌握普通光学显微镜，重点学习油镜的使用技术和维护知识。3.在油镜下观察了几种基本形式的微生物。2、 基本原则 （一）普通光学显微镜的构造 普通光学显微镜由机械系统和光学系统组成（图1-1）。1.机械系统 机械系统包括镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、调节器等。（1）镜座：它是显微镜的基座，可使显微镜平稳地放置在平台上。（2）镜臂：用以支持镜筒，也是移动显微镜时手握的部位。 （3） 镜筒：连接目镜（以下简称目镜）和物镜（以下简称物镜）的金属圆筒。镜筒上端插入目镜，下端与物镜转换器连接。镜筒的长度通常是固定的，通常为160毫米。有些显微镜的镜筒长度可以调整。 （4）物镜转换器：它是一个用于安装物镜的圆盘，位于镜筒下端，其上装有3～5个不同放大倍数的物镜。为了使用方便，物镜一般按由低倍到高倍的顺序安装。转动物镜转换器可以选用合适的物镜。转换物镜时，必须用手旋转圆盘，切勿用手推动物镜，以免松脱物镜而招致损坏。 （5） 阶段：阶段，也称为镜像阶段，是放置标本的地方，是方形或圆形的。台上安装压片夹，可固定被试件；有个标本搬运工。旋转螺钉可以前后左右移动试样。一些样本移动器上刻有刻度，以指示样本的位置，以便重复观察。 （6）调节器：调节器又称调焦装置，由粗调螺旋和细调螺旋组成，用于调节物镜与标本间的距离，使物像更清晰。粗调螺旋转动一圈可使镜筒升降约10mm，细调螺旋转动一圈可使镜筒升降约0.1mm。 图1-1普通光学显微镜的结构 1.镜座2.镜臂3.镜筒4.转换器5.载物台6.压片夹7.标本移动器8.粗调螺旋9.细调螺旋10.目镜11.物镜12.虹彩光阑（光圈）13.聚光器14.反光镜2、光学系统 光学系统包括目镜、物镜、聚光器、反射镜等。 （1）目镜：它的功能是把物镜放大的物像再次放大。目镜一般由两块透镜组成。上面一块称接目透镜，下面一块称场镜。在两块透镜之间或在场镜下方有一光阑。由于光阑的大小决定着视野的大小，故它又称为视野光阑。标本成像于光阑限定的范围之内，在光阑上粘一小段细发可用作指针，指示视野中标本的位置。在进行显微测量时，目镜测微尺被安装在视野光阑上。目镜上刻有5×、10×、15×、20×等放大倍数。可按需选用。 （2） 物镜：它的功能是放大标本并产生物像。物镜可分为低倍镜（4或10）×）、中倍镜（20）×、高倍镜（40~60）×）和油镜（100）×）。油镜一般刻有“oi”（油浸）或hi（同源浸没）字样，有时会有一圈红线或黑线来表示差异。物镜通常标有放大率、数值孔径（NA）、工作距离（从物镜下端到盖玻璃的距离，mm）和盖玻璃厚度等参数（图1-2）。以油镜为例，100/1.25表示放大倍数为100倍，Na为1.25；160/0.17分别表示镜筒长度为160mm，盖玻璃厚度等于或小于0.17mm。 图1-2xsp-i6型显微镜物镜的主要参数 （3） 聚光镜：也称为聚光镜，其功能是将平行光聚焦在试样上，以增强照明。集中器安装在镜台下方，可以上下移动。使用低倍物镜（以下简称低倍物镜）时，应降低浓缩器，使用油透镜时，应升高浓缩器。一个虹膜膜片（通常称为光圈）连接到冷凝器上。进入物镜的光的强度可以通过调节光圈的光圈来调节（物镜的焦距、工作距离和光圈之间的关系见图1-3）。观察透明样品时，孔径应调整得相对较小，这将降低分辨率，但会增强对比度，使样品更容易看到。 图1-3物镜焦距、工作距离与光圈孔径之间的关系 （4） 反射镜：普通光学显微镜的取光设备。它的功能是收集光线并将光线射向集中器。反射镜安装在集中器下方的镜座上，可在水平和垂直方向上自由旋转。反射器的一侧是凹面镜，另一侧是平面镜。一般选用平面镜，光线不足时可选用凹面镜。（2） 普通光学显微镜的性能1。数值孔径 数值孔径（na）又称开口率，是指介质折射率与镜口角1/2正弦的乘积，可用式1-1表示。 娜娜？康涅狄格州？2（1-1） 式中，n为物镜与标本之间介质的折射率，为镜口角（通过标本的光线延伸到物镜边缘所形成的夹角（图1-4）。 物镜的性能与物镜的数值孔径密切相关。数值孔径越大，物镜的性能越好。因为镜子的争吵 ?总是小于180?，所以sin2的最大值不可能超过1。又因为空气的 折射率为1，因此以空气为介质的数值孔径不能大于1，一般为0.05~0.95。根据公式1-1，提高数值孔径的有效方法是提高物镜和试样之间介质