北京棒杆菌天冬氨酸激酶G377定点突变及酶学性质表征_朱运明1_2_王晓飞1_2.pdf

网络出版时间：2014-01-29 10:52 网络出版地址：/kcms/detail/11.2206.TS1052.058.html 2014-01-27 北京棒杆菌天冬氨酸激酶 G377 定点突 变及酶学性质表征 朱运明 1,2，王晓飞 1,2，闵伟红 1,2，詹冬玲 1,2，王隆洋 1,2 (1.吉林农业大学食品科学与工程学院，吉林 长春 130118 ； 2.小麦和玉米深加工国家工程实验室，吉林 长春 130118) 摘要：天冬氨酸激酶（AK ）是多种氨基酸生物合成途径中的关键酶之一，受支路代谢产物调控。本研究采 用饱和定点突变和高通量筛选技术，对北京棒杆菌 AK Gly377 位点进行突变，并筛选获得高活力突变体 G377F，分离纯化后对 G377F AK 酶学性质进行表征。结果表明：突变体 AK 最适 pH 为 9.0，较突变前（WT ） 最适 pH 值 8.5 有所提高；最适反应温度与 WT 一致，均为 25C ；半衰期由WT 的2.6h 提高到 5.3h；pH 耐 受性在 5h 内保持其活力50% 以上，与WT 保持 3h 相同。同时，G377F 对金属离子和有机溶剂均表现出良 好的抗性。其中，Lys 的抑制作用在一定程度上被解除，当 Lys 和 Met 同时存在时对 AK 具有明显的激活 作用。动力学研究显示：G377F AK Vmax 较 WT 提高 10.2 倍；n 值为 1.0 明显低于WT 的 2.7 ，说明AK 正协同性降低，趋向于米氏酶。 关键词：北京棒杆菌 E31 ；天冬氨酸激酶；定点突变；酶学性质 Site-directed Mutagenesis and Charaterization of Aspartate Kinase G377 from Corynebacterium Pekinense Yunming Zhu1,2，Xiaofei Wang1,2，Weihong Min1,2,*， Dongling Zhan1,2，Longyang Wang1,2 ( 1. College of Food Science and Engineering, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China ； 2. National Engineering Laboratory on Wheat and Corn Further Processing, Changchun 130118, China) Abstract: Aspartate kinase(AK) is the first key enzyme in varietal amino acids biosynthesis pathway, in which AK is strictly regulated by metabolites. In this study, AK from Corynebacterium pekinense was mutated using method of site-directed mutagenesis combining with high-throughput screening and G377F with high act