三双向琼脂扩散试验.ppt

实验三 双向琼脂扩散试验 一、实验目的 掌握双向琼扩试验的原理和用途 掌握双向琼扩试验操作方法 观察抗原、抗体在琼脂板中形成的沉淀线 一、原理 沉淀反应：将可溶性抗原与相应抗体混合，在电解质存在条件下，经过一定时间，即可形成肉眼可见的白色沉淀物 单向琼脂扩散试验：指可溶性抗原在相应抗体的琼脂介质中的扩散，可定性、定量抗原 双向琼脂扩散试验，是将抗原和相应抗体分别加入同一凝胶板内的相邻小孔中。两者相互扩散，当扩散到他们的浓度比例合适的部位相遇时，就会形成抗原抗体复合物的沉淀 二、实验材料 传染性法氏囊琼扩抗原 传染性法氏囊琼扩阳性血清 1%琼脂 玻片、打孔器、加样器、tip头等 三、步骤 称取1g琼脂粉，加至100ml 8%高渗盐水中，配制1%琼脂凝胶； 稍冷至55 ℃却后浇板(4ml/块)，注意载玻片应放水平，琼脂勿倒出板外； 待凝固后在琼脂上打梅花孔(孔径2mm,孔距3mm)，孔内的琼脂如未吸出则用注射器针头挑出 封底：将玻片于酒精灯上烘烤背面（温度不宜过高，以不烫手为宜），使琼脂与玻片紧贴； 将抗体按二倍比稀释法稀释成1:2，1:4，1:8，1:16，1:32 中间孔加抗原，周围孔加倍比稀释抗体，其中一个 孔加滴入生理盐水作为对照（小心加样，不要溢出） 置37 ℃湿盒24-48h 结果观察：在抗原抗体比例合适处，出现白色沉淀，以出现明显的沉淀线的最高稀释度为该抗体的效价 四、作业 实验报告（画图并解释实验结果） 琼扩试验应注意哪些事项？ 琼扩试验有何意义？ * * *