GB 5413.20-2013食品安全国家标准　婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定.pdf

中华人民共和国国家标准 GB 5413.20—2013 食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定 2013-11-29发布 2014-06-01实施 GB5413.20—2013 前 言 本标准代替GB/T5413.20—1997 《婴幼儿配方食品和乳粉胆碱的测定》。 本标准与GB/T5413.20—1997相比，主要变化如下： ——修改了标准的名称； ——修改了用于酶反应的显色剂成分； ——增加了第二法雷氏盐分光光度法。 I GB5413.20—2013 食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定 1 范围 本标准规定了婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定方法。 本标准适用于婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定。 第一法 酶比色法 2 原理 试样中的胆碱经酸水解后变成游离态的胆碱，再经酶氧化后与显色剂反应生成有色物质，其颜色 的深浅在一定浓度范围内与胆碱含量成正比。 3 试剂和材料 注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。 3.1 试剂 3.1.1 三羟甲基氨基甲烷[(CHOH) CNH ]。 2 3 2 3.1.2 苯酚(CH OH)。 6 5 3.1.3 浓盐酸 (HCl)。 3.1.4 氢氧化钠(NaOH)。 3.1.5 胆碱氧化酶：置于-20 ℃保存。 3.1.6 过氧化物酶：置于2 ℃~8℃保存。 3.1.7 4-氨基安替比林(C H N O) 。 11 13 3 3.1.8 磷脂酶D：置于-20 ℃保存。 3.2 试剂配制 3.2.1 盐酸(1mol/L)：量取85mL浓盐酸加水稀释至 1000mL。 3.2.2 盐酸(3mol/L)：量取 125mL浓盐酸加水稀释至500mL。 3.2.3 Tris缓冲溶液 （0.05mol/L）：pH=8.0±0.2。 称取6.057g三羟甲基氨基甲烷溶入500mL蒸馏水中，用1mol/L盐酸调pH至8.0±0.2，用蒸馏水定 容至1000mL。此溶液在4℃冰箱中可保存一个月。 3.2.4 用于酶反应的显色剂：取100~120活力单位的胆碱氧化酶、250~280活力单位的过氧化物酶、 75个~100个活力单位的磷脂酶D、15mg4-氨基安替比林，50mg苯酚置于100mL的容量瓶中，用 0.05 mol/LTris缓冲溶液稀释至刻度。临用时配制。 3.2.5 氢氧化钠溶液(500g/L)：称取500g氢氧化钠，溶于水并稀释至 1000mL。 1 GB5413.20—2013 3.3 标准品 胆碱酒石酸氢盐标准品（CH NO ）：纯度≥99%。 9 19 7 3.4 标准溶液配制 3.4.1 胆碱氢氧化物标准贮备溶液 （2.5mg/mL）：称取在 102℃±2℃烘至恒重的胆碱酒石酸氢盐523 mg置于 100mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度。冷藏于4℃±2℃冰箱中，保存不超过 1周。 3.4.2 胆碱氢氧化物标准工作溶液 （250µg/mL）：吸取10.0m