浅析细菌内毒素检测方法及常见问题概要.ppt

方法学验证—供试品干扰预试验 （1）原则上一般根据药品使用说明书或国家药典委员会编制的《临床用药须知》来确定最大剂量。 如儿童用药剂量大于成人用药剂量，则以儿童剂量为准。 （2）为保证安全用药，对于抗感染、抗肿瘤、治疗心血管疾病等重症用的药品、需联合用药的药品药品，可根据计算值适当调整，严格至计算限值的1/2或1/3。 方法学验证—供试品干扰试验 目的：验证预干扰中确定的浓度或倍数下的供 试品对于鲎试剂与内毒素的反应有无干扰作用。 试验方法：须选择两家以上的鲎试剂进行试验 编号 内毒素浓度/配制内毒素的溶液 稀释 用液 稀释 倍数 所含内毒 素的浓度 平行 管数 A 无/供试品溶液 — — — 2 B 2λ/供试品溶液 供试品溶液 1 2 4 8 2λ 1λ 0.5λ 0.25λ 4 4 4 4 C 2λ/检查用水 检查用水 1 2 4 8 2λ 1λ 0.5λ 0.25λ 4 4 4 4 D 无/检查用水 — — — 2 方法学验证—供试品干扰试验 结果判定： 如果有供试品和无供试品测得的鲎试剂灵敏度（λc）均在0.5λ-2.0λ范围内时，则认为供试品在该浓度下不干扰试验，否则需要对供试品做适当处理。 干扰的排除： —对供试品进行更大倍数的稀释； —选择灵敏度更高的鲎试剂； —其他适宜的方法 如过滤、中和、透析或加热处理等排除干扰。 供试品细菌内毒素凝胶法检测 检测方法： 结果 判定 阴性 阳性 阳性 阴性 编号 内毒素浓度/配制内毒素的溶液 平行管数 A 无/供试品溶液 2 B 2λ/供试品溶液 2 C 2λ/检查用水 2 D 无/检查用水 2 注：A 无干扰浓度供试品溶液；B 供试品阳性对照；C 阳性对照；D 阴性对照。 三、常见问题及解决方案 1、实验前未复核鲎试剂产品的灵敏度 鲎试剂灵敏度的改变或质量不符合要求，会影响实验结果，因此实验前应复核鲎试剂产品的灵敏 2、实验器具的洁净度不符合要求 一般用硫酸清洁液浸泡，用自来水冲洗干净，再用新鲜蒸馏水冲洗三道，并干热（250℃）恒温1h即可。实验用的玻璃器具必须严格无菌无热原，建议不要使用一次性塑料制品。 3、实验条件达不到要求 实验室要求洁净，无尘埃空气流通，若是空调室，应备有一台超净工作台。 4、温度不符合要求 实验室温度为25±2℃较好，恒温水浴箱温度为37±1℃为宜。 5、忽视样品本身干扰  供试品若经干扰试验证实存在干扰因素，可采用适宜的方法来消除干扰。消除干扰的一个重要原则是不能影响供试品中的内毒素生物活性。 (1).供试品稀释法 MVD=