血清蛋白电泳精要.ppt

电泳分析血清蛋白电泳血清免疫固定电泳 何肖娟 hxj50701@163.com 南方医科大学 生物化学与分子生物学实验教学中心 电泳技术 电泳：溶液中带电粒子在电场中定向移动的现象称为电泳（electrophoresis）。 电泳技术是利用带电粒子在电场作用下定向移动的特性，对混合物组分进行分离、纯化和测定的一项技术。 电泳的分类 按分离目的：分析电泳和制备电泳 按电场强度：常压电泳和高压电泳 按电泳媒介：自由电泳和区带电泳 区带电泳（按支持介质）：淀粉凝胶电泳 滤纸电泳 醋酸纤维素薄膜电泳 琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳 按支持介质形式：水平式电泳、垂直电泳 按缓冲液pH值：连续pH和不连续pH电泳 临床电泳项目 临床上以琼脂糖电泳法开展的电泳项目： 血清蛋白电泳 免疫固定电泳 尿蛋白电泳 同工酶电泳 脑脊液寡克隆电泳 本周氏蛋白电泳 脂蛋白电泳 血清蛋白电泳（SPE） 检测蛋白质水平病理改变的方法和手段。 主要用于肝病、肾病、自身免疫病、血液病、多发性骨髓瘤等蛋白质紊乱疾病的诊断。 电泳图谱不能直接对临床疾病进行确诊，但可通过特征性图谱对某些疾病进行分类，评估疾病的进程和活动状况，评价治疗方案是否有效。 血清免疫固定电泳（IFE） 是一种包括琼脂糖凝胶蛋白电泳和免疫沉淀两个过程的操作，是免疫沉淀反应的一种混合技术。 优势：将血清蛋白电泳、高分辩率、抗原-抗体特异性免疫反应等有机结合，对蛋白进行分离和定型，形象地观察Ig的各类重链和轻链分型。 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳结果 血清蛋白质的等电点、平均相对分子量、及正常含量 正常血清蛋白质电泳图谱 血清蛋白电泳区带 白蛋白区带：主要由白蛋白构成。 α1-球蛋白区带： α1-抗胰蛋白酶、 α1-脂蛋白、 α1-酸性糖蛋白、甲状腺结合球蛋白、凝血酶原等。 α2-球蛋白区带： α2-巨球蛋白、结合珠蛋白、铜蓝蛋白、 α2-脂蛋白、红细胞生成素等。 β-球蛋白区带：主要含铁蛋白、β-脂蛋白、补体C3、C4、β2-微球蛋白等。 γ-球蛋白区带含IgG、M、A、D、E免疫球蛋白。 正常参考值 A：32～50g/L(60.3～71.4%） α1：10～40g/L（1.4～2.9%） α2：6～10g/L（7.2～11.3%） β：6～13g/L（8.1～12.7%） γ：7～15g/L（8.7～16.0%） 临床意义 1、M蛋白（异常免疫球蛋白）血症： 在β-球蛋白区、γ-球蛋白区或两者之间，出现区带细而浓，有时呈波浪状，在光密度计扫描图上呈尖陡高峰的M蛋白带。 2、蛋白质缺乏症 3、肾病 4、急慢性炎症 5、肝病：肝硬化出现“β-γ桥” 原发性肝癌在Alb与α1-球蛋白之间出现一小的区带，称为甲胎蛋白带。 异常血清蛋白电泳图谱及临床分析 急性炎症及应激型：当机体受到各种损伤或炎症刺激时的病理现象。 主要特征： Alb减少或正常，α1、α2-球蛋白增高，γ-球蛋白增高不明显，当炎症转为慢性时，可明显增加。 病理生理： Alb下降主要是由于蛋白分解亢进所致,α1和α2-球蛋白增加与急性时相反应蛋白α1糖蛋白增加有关，β区带减少是由于转铁蛋白分解代谢增加所致。新生儿由于结合珠蛋白合成功能不完全，当有炎症病灶时，α2区带无明显增高，而α1区带可明显增高。 肾病型：由于肾小球受损引起低蛋白血症，蛋白尿，高脂血症以及全身性水肿。 主要特征： Alb明显降低，α1-球蛋白轻度增加，α2-球蛋白明显增加，γ-球蛋白降低、正常或增高。小儿类脂样肾病时，γ-球蛋白可降低，有时可降低至零；成人肾病综合症时，γ-球蛋白通常增加，特别是狼疮性肾病。 病理生理： Alb降低是由于肾小球滤过增加所致。α1-球蛋白增加，主要是小分子量的α1糖蛋白增加，可能是为了补偿由于Alb降低引起的低渗透压，虽然α1糖蛋白也大量丢失于尿中，但体内合成量超过排泄量，故仍可增高。α2-球蛋白明显增加是由于α2-球蛋白和低密度脂蛋白相对增加所致。β球蛋白降低主要是分子量小的转铁蛋白排泄于尿中所致。γ-球蛋白降低主要是由于漏出于尿中及体内分解亢进所造成，而慢性肾炎、狼疮性肾炎等γ-球蛋白增加，可能是由于免疫刺激，使IgG增加所致。 弥漫性肝损伤型 主要特征： Alb明显降低, α1-球蛋白在轻度时可略增加，但肝细胞破坏严重时，则α1、