13第九章噬菌体与杂菌的污染与防治概览.ppt

第九章 噬菌体与杂菌的防治 1.微生物发酵中噬菌体（phage）的污染与防治 2.微生物发酵中杂菌的污染与防治 1.Glu发酵中噬菌体的污染与防治 1.1 phage的危害 轻者，引起发酵延迟及L-Glu收率下降。 重者，溶菌，甚至倒罐，损失严重。 噬菌斑 少量烈性噬菌体与大量敏感细胞混合后，涂布在培养基平板上，一定温度下培养10-20h后，可见到嗜菌的透明小圆斑，为噬菌斑。 1.2 phage的一般特性 ①大小：nm级 ②形态：多为蝌蚪形，也有微球形，丝状。 ③核酸种类：DNA或RNA。 ④化学组成：核酸和蛋白质构成的大分子生物，核酸占30%?50%。 ⑤增殖：在寄主的对数生长期。 ⑥专一性寄生。 ⑦稳定性：增殖适温25 ?35℃。80 ℃灭活，对酸碱不稳定。 ⑧ phage的分布与存在：耐干燥，随空气传播。 ⑨影响phage吸附的因子：Ca2+、Mg2+。 ⑩对氧化物敏感：高锰酸钾、漂白粉、甲醛等。 名词术语： 潜伏期 噬菌斑 裂解量 感染复数 自外溶菌 Phage效价 1.3 phage的传播途径 ①菌本身携带phage。 ②工厂环境中phage污染（逃液；取样液；排气；废弃液排放；洗罐废水）→活菌体→ phage增殖，在空气中传播。 ③设备有死角、渗漏现象。 ④其它phage变异为寄主的phage。 例如：汉阳味精厂新旧设备污染phage的比较 上海天厨味精厂林志龙对phage污染因素分析 1.4 phage污染后的异常现象 发酵前期0?12 h，两高三低现象。 ①pH高达8.0以上，不回降。 ②残糖高，耗糖停止。 ③OD值开始升高后下降或不变。 ④Glu产酸缓慢或不产Glu。 ⑤发酵温度低。 1.5 phage污染的防治 1.5.1加强环境卫生。 ①地面、墙壁光滑。 ②经常用5%漂白粉等喷洒地面。 ③严格活菌体的排放。 ④加强环境中phage的监测。 ⑤车间布局要合理。 ⑥改革空气系统，总过滤器、分过滤器定期灭菌。 ⑦加强种子管理，确认无误后接种。 1.5.2 轮换使用菌种。 1.5.3 药物防治。 1.6 Glu发酵污染phage后的挽救。 罐内灭phage（升温至70-80℃）。 1.7 phage的检查和保藏方法。 单层琼脂平板 双层琼脂平板 1.8 phage的保存 ① phage 悬浮液。 ②冷冻干燥。 ③滤纸法。 2. 发酵中杂菌的污染与防治 2.1杂菌污染的危害 轻：影响产量和质量。 重：倒罐。 2.2 杂菌污染的判断 ①镜检 ②划线 ③肉汤培养。 2.3 杂菌污染的原因分析及防治 1.以污染现象分析染菌的原因 时间 污染杂菌类型 污染范围 2.防治 * * T4噬菌体 8.21 9.30 5.24 4.54 20T 3.05 3.63 7.71 2.33 75 T 重消率（%） 1987 1986 1985 1984 年 罐 项目 1.63 4.07 10.73 14.63 33.25 30.33 致命度（%） 二级 种子 油管路 消毒操作不当 设备 环境 污染 空气 系统 失效 事件 *