100万株组培苗工艺流程设计说明.doc

. . . . 100万株组培苗生产工艺流程设计 学 院：生物科学与工程学院 姓 名：练小龙 学 号专 业：生物技术 实验日期：2011/1 100万株组培苗生产工艺流程设计 一．实验目的： 1、掌握工业化生产厂房的设置的基本原则 2、掌握工业化生产所需的仪器设备 3、设计组培苗工业化生产的工艺流程 二、实验设计思路： 组培室建设首要考虑的问题就是 组培室需要哪些设备条件和需要什么样的培养条件。对这些有了全面了解以后，我们便可以因地制宜地新建或利用现有房屋建设实验室。在设计组培室时，一般情况应按 组培的流程来设计，同时考虑人物分流顺畅，空间合理利用以及预算的合理安排。植物组织培养要求严格的无菌的条件，需要一定专业仪器设备、器材和用具，同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件以及管理人员的精心策划。 三、组培厂房设备 1、组培快繁车间： 准备间:①预处理室 ②试剂室 ③培养基制备室 接种间:④灭菌室：高压蒸汽灭菌锅 ⑤接种室：超净工作台 注：为了减少污染率，故接种间为多个无菌的小接种室，培养间也是同理，对培养的好的可以扩大培养。缓冲间要尽量减少人员流动，不要在此逗留休息。 培养间:⑥培养室 ⑦观察检测室 2、试管苗移栽车间：温室、大棚等 3、大田圃苗培育车间：温室、大棚等 准备间 清洗室 接种室 常规培养间 温室、大棚 过道 缓冲间 培养基 配制室 灭菌室 无糖培养间 四、准备工作： （1）选择育苗容器：一般采用穴盘，带根苗需穴格较大，扦插苗则需穴格较小。 （2）选种：选种时必须选取包括产量、梳型、抗性等综合因素好的无检疫性病虫害种芽进行繁殖.对其进行标记并编号作好相关记录. （3）基质选配：①具备良好的物理特性：保水透气； ②具备良好的化学特性：稳定、无毒、PH值及电导率等适宜； ③物美价廉，便于就地取材。 （4）基质的种类：①有机基质：泥炭、椰糠、花生壳、木屑等； ②无机基质：蛭石、珍珠岩、次生云母矿石、河沙、炉渣等。 （5）场地、工具及基质灭菌、装盘：①场地、工具灭菌：多采用化学药剂灭菌； ②基质灭菌：多采用蒸汽灭菌或化学药剂灭菌； ③基质装盘. （6）营养液的配制：①营养液的成分：大量、微量等 ②营养液常用药品的来源：实验研究需分析纯，规模化生产用化学纯或工业化合物； ③营养液配方； ④植物营养液的配制. 五、工艺流程: 1．培养瓶洗涤 先将其中培养基冲干净,然后在清水中浸泡1小时,刷洗瓶内污物,泡入1%的洗衣粉溶解液中,再进行刷洗,尤其是瓶口处也要认真刷洗.刷洗完后于水龙头下以流水冲洗干净.最后倒置于洁净的器皿篮中,以便沥干水分. 2．培养瓶浸泡 培养瓶常规洗净后，浸入每升自来水加0.15 ml的S105溶液中1.5-2小时，以浸没培养瓶为度。用时捞起培养瓶及瓶盖倒扣滤干水即可。 3．培养基配制。 依照所设计的培养基配方，按比例吸取母液注入容量瓶内，加水定容，倒进不锈钢锅内加S106抗菌剂‵凝固剂和糖。边加热边搅拌以免煮糊，使凝固剂和糖完全溶解。用盐酸或氢氧化钠溶液调整pH值，煮沸。或（ 依照所设计的培养基配方，按比例吸取母液和S108注入量杯内。量取1升水和30克白糖、3—4克琼脂放入锅内煮沸后，倒入装有母液的量杯内搅拌匀即可分装） 4．培养基分装。 将培养基趁热均匀分装到培养瓶内，盖好瓶盖。 把培养瓶放平，凝固后可进行接种. 5.外植体消毒。 首先将外植体用自来水冲洗干净。幼嫩的外植体材料（如幼叶、幼芽、幼茎段）幼嫩的材料可用50%酒精消毒8---10秒，自来水冲洗2次。再用0.1%HgCl2溶液加“吐温-80”两滴，浸没材料，轻微摇动，消毒5-8分钟，再用自来水冲洗4-5次。老的材料（如半木质化、木质化的茎段）70%酒精消毒8---10秒，自来水冲洗2次。再用0.1%HgCl2溶液加“吐温-80”两滴，浸没材料，轻微摇动，消毒5-8分钟，再用自来水冲洗4-5次。最后浸泡在100ml的消毒液（100ml自来水中加入1ml S107和1ml S106）中15-30分钟。 6．组培苗 包括取苗、切苗和接苗三步。 1)、工作环境：可选择干净整洁的房间，一张合适的桌子、一把椅子，准备好一个不锈钢小托盘或一块清洁的玻璃，两把手术剪刀、两把手术刀、两把镊子、一个装有适量70%酒精的广口瓶（高度适当低些，便于接种工具浸入、取出），一包药棉、一个工具架和一个废纸篓。 2)、接种过程： ①接种前；工作人员必须肥皂洗手 ②将培养瓶、瓶苗、手术刀、镊子、70%酒精广口瓶、药棉、工具架、无菌垫板等，整齐合理地摆放在桌子上。 ③将瓶苗取出，放在经70%酒精消毒的无菌垫板上