低浓度有机磷农药DDV对微囊藻生长的影响简介.doc

探讨有机磷和无机磷对微囊藻生长的影响 吴丽　(藻类工程和显微镜实验室/南京师范大学生命科学学院,江苏南京　) 敌敌畏(Dichlorvos，DDVP)，化学名O，O-二甲基-O(2，2-二氯)乙烯基磷酸酯，分子式为C4H7C12O4P是一种高效、速效、广谱性的有机磷杀虫剂DDV为对象来研究有机磷和无机磷为微囊藻生长的影响，其对研究微囊藻的暴发增殖和水华有积极意义。 ???1 材料与方法 1. 1　实验材料 供试农药：DDV 80%乳油（所含磷的质量分数为11%） 供试试剂：质量分数为8.088 g·L–1 K2HPO4（含磷量为1.1 g·L–1 ） 供试藻类：群体M. aeruginosa XW01和单细胞M. aeruginosa 7806均取自南京师范大学生命科学学院藻类工程和显微镜室。 1.2 试验方法 1.2.1 缺磷培养基的配置：实验所用的培养基是BG-11，其中含有大量的磷元素（约0.54g/l-1）。在做无磷对照时，需要把BG-11中的K2HPO4抽去，其它的元素仍按照原来的含量补上去。 1.2.1 藻的预培养 藻的预先培养在无菌条件下,将群体M. aeruginosa XW01和单细胞M. aeruginosa 7806转移至 BG-11培养液中,培养至对数生长期,如此反复转接3次后取对数生长期的微囊藻作为测试材料。培养条件:温度25 ℃, 光照度为2500～5 000 lx, 光照时间24h。 1.2.2 DDV对蓝藻生长的影响实验 先将 DDV和K2HPO4用BG-11稀释到实验需要的不同质量浓度（如下表），通过预实验对实验浓度的摸索，对群体M. aeruginosa XW01和对单细胞M. aeruginosa7806设置浓度如下表所示: 名称 不同DDV的浓度（mg·L–1） M. aeruginosa XW01 0 1 5 10 30 50 100 1000 M. aeruginosa7806 0 0.01 1 5 10 50 100 ---- 表一：DDV不同稀释浓度 名称 不同K2HPO4的浓度（mg·L–1） M. aeruginosa XW01 0 0.011 0.11 0.55 1.1 5.5 11 M. aeruginosa7806 0 0.011 0.11 0.55 1.1 5.5 11 表二：K2HPO4不同稀释浓度 然后在无菌条件下，将处于对数生长期的藻( 4 ml)接入装有40 ml不同质量浓度DDV和K2HPO4培养液的100 ml 锥形瓶中。处理组加不同质量浓度DDV和K2HPO4，对照组不加DDV和K2HPO4,每个处理设3个平行。静置培养,每天定时摇2次。连续记录7d测定650nm处光吸收值，5d以后用丙酮法测两种藻的叶绿素a含量。 1.3藻生长量的测定方法 1. 3.1　叶绿素a 含量的测定 采用丙酮法提取叶绿素a，通过分光光度法测定，分别测量藻液在663nm和645nm处的吸光度。 1.3.2 吸光值的测定 将群体微囊藻群体M. aeruginosa XW01和单细胞M. aeruginosa 7806在400～800 nm范围内进行全光谱扫描,发现在650 nm处有最大吸收。接种当天测定藻液在650nm 处的吸光度, 然后每隔24 h 测定一次，每天定时测量群体M.aeruginosa XW01和单细胞M. aeruginosa 7806的吸光值，连续测7天。 1.4 碱性磷酸酶的测定方法 1.4.1碱性磷酸酶测定原理：本实验采用的是磷酸苯二钠比色法测定碱性磷酸酶，测胞内胞外碱性磷酸酶，其中要释放胞内碱性磷酸酶，还要经过超声波破碎细胞，最后通过分光光度法测定，测酶液在510nm的吸光度。 1.4.2 碱性磷酸酶含量的计算：本100ml藻液在37℃与底物作用15min，产生1mg酚为1个金氏单位。公式：Y=0.0093X+0.0127（X ：含酶量Y：吸光光度值）最终计算出每毫克叶绿素中含碱性磷酸酶的量。 【参考范围】 结果与分析 2. 1　不同浓度DDV对2种藻生长的影响 图1：不同浓度DDV对群体M. aeruginosa XW01生长的影响 图2：不同浓度DDV对单细胞M. aeruginosa 7806生长的影响 通过图1和图2，我们对群体M. aeruginosa XW01和单细胞M. aeruginosa 7806对不同浓度DDV的敏感性进行比较，结果发现：DDV浓度在1.00 mg·L–1时，其对群体微囊藻和单细胞微囊藻都有一定的促进作用，并且在一定的DDV浓度范围内，两种形态的微囊藻都表现出低浓度促进，高浓度抑制的效应。但群体M. aeruginosa XW01对DDV浓度反应的灵敏度不如处于单细胞状态的M. aer