GB/T 19524.2-2004肥料中蛔虫卵死亡率的测定.pdf

ICS 65.080 B 10 中华人民共和国国家标准 GB/T 19524.2—2004 肥料中蛔虫卵死亡率的测定 Determination of mortality of ascarid egg in fertilizers 2004-05-31 发布 2004-10-01 实施 发布 GB/T 19524. 2—2004 —1— 刖 目 本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出。 本标准由农业部微生物肥料质量监督检验测试中心负责起草。 本标准主要起草人:姜昕、李俊、沈德龙、曹凤明、李力。 I GB/T 19524.2—2004 肥料中蛔虫卵死亡率的测定 1范围 本标准规定了肥料中蛔虫卵死亡率的测定方法。 2测定方法原理 将碱性溶液与肥料样品充分混合，分离蛔虫卵，然后用密度较蛔虫卵密度大的溶液为漂浮液，使蛔 虫卵漂浮在溶液的表面，从而收集检验。 3仪器设备 往复式振荡器 ；天平;离心机；金属丝圈 （约但.0 cm）；高尔特曼氏漏斗；微孔火棉胶滤膜935 mm, 孔径0.65卩m 〜0. 80 Mm）；抽滤瓶;真空泵;显微镜;恒温培养箱及其他试验室常用仪器、物品等。 4试剂 本标准所用试剂，在没有注明其他要求时，均指分析纯。 a） 50. 0 g/L氢氧化钠溶液； b） 饱和硝酸钠溶液 （密度1.38-1.40）； c） 500 mL/L甘油溶液； d） 20 mL 〜30 mL/L 甲醛溶液或甲醛生理盐水。 5检验步骤 5. 1样品处理 称取5.0 g〜10.0 g样品 （颗粒较大的样品应先进行研磨），放于容量为50 mL离心管中，注入氢氧 化钠溶液25 mL〜30 mL,另加玻璃珠约10粒，用橡皮塞塞紧管口，放置在振荡器上，静置30 min后，以 200 r/min 〜300 r/min频率振荡10 min 〜15 min 。振荡完毕，取下离心管上的橡皮塞，用玻璃棒将离心 管中的样品充分搅匀，再次用橡皮塞塞紧管口，静置15 min 〜30 min后，振荡10 min 〜15 min。 5. 2离心沉淀 从振荡器上取下离心管，拔掉橡皮塞，用滴管吸取蒸憾水，将附着于橡皮塞上和管口内壁的样品冲 入管中，以2 000 r/min〜2 500 r/min速度离心3 min 〜5 min后，弃去上清液 。然后加适量蒸懈水，并 用玻璃棒将沉淀物搅起,按上述方法重复洗涤三次。 5. 3离心漂浮 往离心管中加入少量饱和硝酸钠溶液 ，用玻璃棒将沉淀物搅成糊状后，再徐徐添加饱和硝酸钠溶 液，随加随搅，直加到离管口约1 cm为止，用饱和硝酸钠溶液冲洗玻璃棒，洗液并入离心管中 ，以 2 000 r/min〜2 500 r/min速度离丿C? 3 min 〜5 min。 用金属丝圈不断将离心管表层液膜移于盛有半杯蒸懈水的烧杯中，约30次后，适当增加一些饱和 硝酸钠溶液于离心管中，再次搅拌、离心及移置液膜,如此反复操作3次〜4次，直到液膜涂片在低倍显 微镜下观察不到蛔虫卵为止。 5.4抽滤镜检 将烧杯中混合悬液，通过覆以微孔火棉胶滤膜的高尔特曼氏漏斗抽滤 。若混合悬液的浑浊度大，可 更换滤膜。