RNAi_产品使用手册.pdf

THE RNAi COMPANY siRNA 操作手册 上海吉玛制药技术有限公司 Shanghai 上海吉玛 Co.,Ltd. 1 Ⅰ. RNAi 简介 1 A. RNAi 实验原理 B. RNAi 实验流程 C. RNAi 实验所需试剂 D. 上海吉玛 RNAi 相关产品 Ⅱ. siRNA 设计 7 A. 哺乳动物 siRNA 设计 B. 上海吉玛 siRNA 产品特性 C. siRNA oligo 技术数据 Ⅲ. siRNA 对照 9 A. 普通阴性对照 B. 荧光标记的阴性对照 C. siRNA 阳性对照 D. 转染试剂对照 E. 避免 off-target 对照 Ⅳ. siRNA 转染 10 A. siRNA 转染的方法 B. RNAi-Mate 转染试剂 C. RNAi-Mate 适用的细胞类型 D. 转染前细胞培养 E. RNAi-Mate ：siRNA/DNA 比例 F. 贴壁细胞转染程序 G. 悬浮细胞 siRNA 转染程序 H. DNA 和 siRNA 共转染细胞程序 I. 体内 siRNA 导入方法 J. siRNA 转染常见问题与建议 Ⅴ. mRNA 水平 RNAi 效果监测 15 A. siRNA 细胞转染条件优化 B. Real-Time PCR RNAi 效果检测 C. Real-Time PCR 结果分析 Ⅵ. 蛋白质水平 RNAi 效果监测 20 A. western-blot 原理 B. western-blot 操作步骤 C. western-blot 上样液的制备 D. western-blot 常用试剂的配制 Ⅶ. RNAi 实验常见问题解答 22 2 Ⅰ. RNAi 简介 A. RNAi 实验原理 RNA 干扰（RNA interfering ，RNAi ）现象是由与靶基因序列同源的双链RNA （double-stranded RNA，dsRNA ）引发 的广泛存在于生物体内的序列特异性基因转录后的沉默过程。细胞中的核糖核酸酶 III 家族成员之一的，dsRNA 特异性 的核酸酶Dicer 将 dsRNA 裂解成由 21-25 个核苷酸组成的小干扰 RNA (small interfering RNA ，siRNA)，随后 siRNA 作为 介导子引起特异性地降解相同序列的 mRNA ，从而阻断相应基因表达的转录后基因沉默机制。 3 B.