SNT 2522.1-2010进出口辐照食品检测方法 微生物学筛选法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2522.1-—2010进出口辐照食品检测方法微生物学筛选法Detection of irradiated food for import and export-Microbiological screening method2010-09-16实施2010-03-02发布FOB中华人民共和国后余康发器185转查设真发布数码防伪国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2522.1—2010前言本标准的附录 A为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国宁波出入境检验检疫局。本标准主要起草人：郭利平、胡群、邹春颖。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 2522.1--2010进出口辐照食品检测方法微生物学筛选法1 范围本标准规定了进出口食品是否经过辐照处理的微生物学快速筛选方法。本标准适用于冷冻禽肉、畜肉~水产品等各类生鲜食品是否经过辐照处理的快速筛选。本标准适用于从上述食品中筛选出可能经过辐照处理的食品，但不排除其他不破坏食品中内毒素的灭菌方法对该食品进行过处理。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而为本标准的条款。凡是注明日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是未注明日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法SN/T0330出口食品中微生物学检验通则3方法提要内毒素是存在于革兰氏阴性菌细胞外膜上有成分，食品经过定剂量辐照处理后，食品中活的革兰氏阴性菌基本上会被杀死，但所残留的内毒素，不会因为辐照处理而消失。因此可以通过对内毒素的定量测定来估计食品中被杀死和未被杀死的革兰氏阴性菌总数,结合食品中活的革兰氏阴性菌的培养计数，比较两者差异可以判断该食品是否经过辐照处理。4术语和定义下列术语和定义适用于本标准。4.1革兰氏阴性菌gram negative bacteria,GNB用革兰氏染色法染色后呈红色或土黄色的细菌，如大肠杆菌、志贺氏菌、沙门氏菌、痢疾杆菌和伤寒杆菌等。4.2内毒素endotoxin内毒素又名脂多糖、类脂A、热源,是革兰氏阴性菌的细胞外膜上特有成分,可以迅速地引起鲨血细胞裂解形成凝固。4.3内毒素检测 limulus amoebocyte lysate test, LAL内毒素可激活鲨试剂的凝固酶原,使鲨试剂产生凝集反应形成凝胶，利用该现象可以对样品中存在的内毒素进行检测。5设备和材料5.1可调温水浴锅。 SN/T 2522.1—20105.2高压灭菌锅。5.3电热恒温培养箱。5.4高温烘箱。5.5涡旋振荡器。5.6　电子天平：感量为0.001g。5.7 均质器:8 000 r/min～10 000 r/min。5.8灭菌吸管:1 mL,具有 0.1 mL刻度。5.9 微量移液器:20 μL～200 μL,100 μL～1 000 μL。5.10一次性注射用针筒:100 mL。5.11试管:18 mmX180 mm。5.12灭菌培养皿:直径 90 mm。5. 13酒精灯。5.14灭菌剪刀。5.15纯水制备器。5.16石蜡封口膜。5.17微量离心管：1.5mL。5.18无热源安瓶。6 培养基与试剂实验用水符合 GB/T 6682二级水规格(电导率≤1.0 μs/cm）。6.16.2缓冲蛋白陈水（见附录第 A.1章）。营养琼脂培养基（见附录第 A.2章）。6.3牛奶琼脂培养基（见附录 A.3.1）。6.46.5结晶紫溶液（见附录A.3.2）。青霉素溶液（见附录 A.3.3）。6.6革兰氏阴性菌选择性培养基（见附录 A.3.4)。6.76.8注射用无热源生理盐水。6.9去离子水。6.10内毒素标准品:50 EU/管。6.11鲨试剂1）:灵敏度0.5 EU/mL。样品抽样、贮存和运送77.1抽样数量及抽样方法按 SN/T 0330 进行。7.2样品的贮存和运送样品应于4℃保存,24h内送往实验室检验，如不能立即检验，应置于一20℃保存，最长保存时间不超过 30 d。.8检验程序辐照食品微生物学筛选法检验程序见图1。1）厦门鲨试剂厂生产的鲨试剂为适合市售产品的实例,给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可，如果其他产品具有相同的效果，可经实验评估后使用这些等效产品。2 SN/T 2522.1—201010g混合样品+90mL无热源生理盐水8 000 r/min均质1 min ～2 min10-样品稀释液内毒素检测10倍梯度稀释计算log1o EU/g各取0.1mL稀释液于营养琼脂培养基表面，涂布后静置90min覆盖约10mL选择性培养