细胞骨架的观察幻灯片.ppt

实验6 细胞骨架的观察 【目的】 掌握用光学显微镜观察植物细胞骨架的原理及方法，观察光学显微镜下细胞骨架的网状结构。 【原理】 植物细胞用适当浓度的TritonX-100处理后，可破坏细胞内蛋白质，但细胞骨架系统的蛋白质却保护完好。 考马斯亮蓝 R250(Coomassiebrilliant blue R250, 考马斯亮蓝R250)是一种蛋白质染料，处理后的材料用考马斯亮蓝R250染色后，用光学显微镜观察，可以见到一种网状结构，即是细胞骨架结构。 【材料】 洋葱鳞叶。 【实验用品】 1．试剂： (1) 2％考马斯亮蓝R250染色液：称考马斯亮蓝R250 lg，溶于250 mL无水乙醇中，加冰醋酸35 mL，再加蒸馏水至500 mL。 (2) 磷酸缓冲液(pH 6.8)：6.8 mmol／L磷酸缓冲液，调至pH 6.8。 (3) M缓冲液(pH 7.2)：50 mmol／L咪唑、50 mmol／L氯化钾、0.5 mmol／L氯化镁、l mmol／L乙二醇双乙胺醚、0.1mmol／L乙二胺四乙酸、1 mmol／L巯基乙醇，调至pH 7.2。 (4) 1％Tritan X-100：用M缓冲液配制。 (5) 3％戊二醛：用M缓冲液配制。 (6) 中性树胶。 2．器具： 显微镜，烧杯，玻璃滴管，载玻片，盖玻片，镊子。 【实验步骤】 1．用镊子撕取洋葱鳞叶内侧的表皮若干片(约l cm2大小若干片)，置于50 mL烧杯中，加入pH 6.8磷酸缓冲液，使其下沉。 2．吸去磷酸缓冲液，用1％Triton X-100处理20 min。 3．吸去Triton X-100，用M缓冲液洗3次，每次5 min。 4．用3％戊二醛固定30 min。 5．磷酸缓冲液(pH 6.8)洗3次，每次5 min。 6．0.2％考马斯亮蓝R250染色10 min。 7．蒸馏水洗2次，然后将样品置于载玻片上，加盖玻片，于普通光学显微镜下观察。 8．如果染色效果好，则可依次用50％乙醇、70％乙醇、95％乙醇、正丁醇、二甲苯处理样品，各5 min。然后将样品平展于载玻片上，加1滴中生树胶，盖上盖玻片封片，制成永久切片。 【实验报告】 描绘所观察到的洋葱鳞叶细胞骨架图。 * * *