Caco-2细胞模型的构建及胰岛素 _环糊精包合物的透膜能力研究.doc

  Caco-2 细胞模型的构建及胰岛素 /环糊精包 合物的透膜能力研究# 张列峰，徐昕，缪佳慧* 5 10 15 20 25 30 35 40 （南京师范大学生命科学学院） 摘要：培养出生长良好的 Caco-2 细胞，模拟胰岛素小肠上皮吸收的 Caco-2 细胞模型,并将 该细胞模型应用于环糊精及其衍生物包裹胰岛素体外吸收特性的研究。研究结果表明 HP-β -CD 能作为吸收促进剂促进胰岛素的吸收，包合前和包合后胰岛素均是通过被动扩散的方式 进行转运；此外包合物组表观渗透系数比未包合胰岛素增加约 10 倍，包合物能显著促进胰 岛素的渗透。该细胞模型的建立为进一步筛选口服胰岛素提供理论依据和客观条件，环糊精 的包合技术显示对胰岛素渗透能力的应用前景。 关键词：Caco-2 细胞；胰岛素；透膜能力；环糊精。 中图分类号：Q53 Establishment of Caco-2 cell model and study on penetrating membrane capacity of Insulin/cyclodextrin compounds Zhang Liefeng, Xu Xin, Miao Jiahui (life science school, Nanjing Normal University, Nanjing 210046) Abstract: Cultivate a good stand of Caco-2 cells, to simulate intestinal epithelial absorption of insulin. And this model is applied to study the absorption characteristics of insulin/cyclodextrin compounds. The results show that HP-β-CD can enhance the absoption of insulin, and insulin is carried out by means of passive diffusion trasfer before and after compouding. In addition infiltration coefficient ratio of inclusion compounds increased about 10 times, HP-β-CD can significantly promote the permeation of insulin. Establishment of cell model of oral insulin provides a theoretical basis and objective conditions for further filtering and cyclodextrin inclusion technique shows the penetration ability of insulin application. Key words: Caco-2 cell; Insulin; Ability of penetrating membrane; Cyclodextrin 0 引言 Caco-2 来源于人类结肠癌、直肠癌，在普通的培养条件下就可以在有孔的多聚碳酸酯 膜上自发的分化为肠上皮细胞单层，因此可以模拟体内小肠上皮细胞层。Caco-2 细胞具有 与小肠上皮细胞相同的细胞极性和紧密连接，一些存在于小肠上皮细胞的主动转运系统，如 糖类、氨基酸、二肽、胆酸及维生素 B12 内源性因子的主动转运载体在 Caco-2 细胞都有表 达；存在于小肠细胞刷状缘的酶，如氨肽酶、碱性磷酸酶、蔗糖酶及γ2 谷氨酰转肽酶也同 样存在于 Caco-2 细胞；Ⅰ相代谢酶 CYP1A1 及相代谢酶谷胱甘肽 S2 转移酶，β2 葡糖 ， 隆 TC7 株中，表达有 CYP3A 。由于形态学及生化性质都与小肠上皮很相似，另外，Caco-2 细胞模型的实验条件，如转运介质的 pH 值及受试物浓度比较容易控制。由于如上特点， Caco-2 细胞模型被广泛应用于体外药物及营养物质在肠道的吸收研究，作为药物透膜能力 评价的快速工具，能够在细胞及分子水平提供关于药物分子通过小肠黏膜的吸收、转运的信 基金项目：博士点基金（20103207120008） 作者简介：张列峰（1976，9），女，副教授，生物大分子药物研究. lfzhang@njnu.edu.cn -1-   息  ［3-5］  。 HP-β-CD 与胰岛素形成包合物后，能明显增加其二硫键的稳定性、增强抗酸碱、高温、 肠道