细菌内毒素和热原检查法.ppt

除去玻璃器皿表面可能存在的外源性内毒素，玻璃器皿置箱后将烤箱调至180℃，待烤箱温度升到设定的温度后开始记时，须干烤至少2小时。达到时间后，关断电源。待烤箱温度自然降至室温，在不开启金属容器的情况下，可两周内使用，否则须再次加热除去可能存在的外源性内毒素。塑料制品清洗干净后在30％双氧水中浸泡4h，再用无热原水充分冲洗后在60℃烘箱中烘干备用。第23页，共48页，星期日，2025年，2月5日鲎试剂灵敏度复核内毒素标准溶液的制备取NSE或WSE一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，再用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开，防止玻璃屑落入瓶内。按标准品使用说明书用移液管加入规定量的BET水溶解其内容物，用封口膜将瓶口封严。置旋涡混合器上混合15分钟，然后制备成所需浓度的细菌内毒素标准溶液即2.0λ、1.0λ,0.5λ,0.25λ（λ为所复核鲎试剂的标示灵敏度），每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒（详细过程请参见使用说明书）。第24页，共48页，星期日，2025年，2月5日示例例如使用NSE(内毒素含量为9000EU/支)时的方法如下：溶解：准确吸取BET水1ml加入NSE的安瓿内，用封口膜将瓶口封严，置旋涡混合器混合15分钟，即为9000EU/ml内毒素标准溶液。稀释：取0.3ml内毒素标准溶液加上2.7mlBET水即为1→10稀释液，得到900EU/ml内毒素标准溶液。第25页，共48页，星期日，2025年，2月5日取0.3mL1→10稀释液，加上2.7mLBET水即为1→100稀释液，得到90EU/ml内毒素标准溶液。往后依次类推。也可写成下列格式：第26页，共48页，星期日，2025年，2月5日9000EU/ml→900EU/ml→90EU/ml→9EU/ml→1EU/ml→0.5EU/ml→0.25EU/ml→0.125EU/ml→0.0625EU/ml在上述稀释过程中，每稀释一步，均须旋涡混合器上混合30秒钟。0.3ml2.7ml2.4ml0.3ml1ml1ml第27页，共48页，星期日，2025年，2月5日待复核鲎试剂的准备在制备内毒素标准溶液的同时，取0.1ml/支的鲎试剂18支轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底。用砂轮在瓶颈处轻轻划痕，75%乙醇棉球擦拭后启开备用，加入0.1mlBET水，使鲎试剂充分溶解，避免产生气泡。第28页，共48页，星期日，2025年，2月5日

若待复核鲎试剂的规格不是0.1ml/支时，按标示量加入BET水溶解，将溶解后的鲎试剂溶液混匀后每0.1ml分配到10×75mm凝聚管中，要求至少分配18管备用。第29页，共48页，星期日，2025年，2月5日加样将已充分溶解的待复核鲎试剂18支(管)放在试管架上，排成5列，其中4支(管)4列分别加入2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ的内毒素标准溶液；2支(管)1列分别加入BET水，作为阴性对照。内毒素标准溶液和BET水加样量均为0.1ml/支。第30页，共48页，星期日，2025年，2月5日加样结束后，用封口膜封口，轻轻混匀，避免产生气泡，连同试管架放入37摄氏度水浴中，试管架保持水平状态，保温60±2分钟.第31页，共48页，星期日，2025年，2月5日结果判定：将试管从水浴中轻轻取出，缓缓倒转180°时，管内凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（＋）；凝胶不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为（－）。第32页，共48页，星期日，2025年，2月5日鲎试剂灵敏度复核

如最大2.0λ浓度管均为阳性，最低浓度0.25λ4管均为阴性，阴性对照为阴性，按下式计算反应终点浓度的几何平均值即为鲎试剂灵敏度的复核结果（λc）。λc＝lg-1(ΣX/4)式中X为反应终点浓度的对数值（lg）。反应终点浓度是系列浓度递减的内毒素溶液中最后四个呈阳性的结果浓度。第33页，共48页，星期日，2025年，2月5日结果记录阴性0.50.250.1250.0625-++---++---++---+---第34页，共48页，星期日，2025年，2月5日第1页，共48页，星期日，2025年，2月5日基础知识热原：注入人体后可引起发热反应的物质。1材料的致热性。2因微生物污染造成的热原反应。第2页，共48页，星期日，2025年，2月5日热原的检查方法体内热原检查法——兔温法（PT)——是一种体内的、全热原的检查方法。1942年USP12版第一次收载。各国药典至今仍在使用。体外热原检查法（ITP)——是一种体外的利用人