升麻炮制前后有效成分的比较研究升麻炮制前后有效成分的比较研究.doc

升麻炮制前后有效成分的比较研究 周保琪 2009级中药传承班 河南中医学院 河南郑州 450008 [摘要] 目的:建立测定升麻中有效成分阿魏酸和异阿魏酸含量的方法,并比较炮制前后阿魏酸、异阿魏酸和272脱氧升麻亭的含量差异。方法:阿魏酸和异阿魏酸测定方法:色谱柱为YMC2Pack ODS2C18柱(4. 6 mm ×150 mm, 5μm) ,乙腈2水2乙酸(15 ∶85 ∶0. 25)为流动相,流速0. 6 mL /min,柱温26 °C,紫外检测波长320 nm; 272脱氧升麻亭测定方法:色谱柱为YMC2Pack ODS2C18柱(4. 6 mm ×150 mm, 5μm) ,乙腈2水2乙酸(40 ∶60 ∶1)为流动相,流速0. 6 mL /min,柱温26 °C,示差检测器。结果:测定阿魏酸线性范围( r) ,加样回收率为(RSD ) ;异阿魏酸线性范围( r ) ,加样回收率为 (RSD ) 。结论该方法简便、快捷、准确,重复性好,适合于升麻药材和饮片的质量控制。 [关键词] 升麻; 阿魏酸; 异阿魏酸; 272脱氧升麻亭; 炮制 升麻为常用中药,具有发表透疹、清热解毒、升举阳气等功能, 2010年版《中国药典》收载其原植物有大三叶升麻Cim icifuga heracleifolia Kom. 、兴安升麻C. dahuricaMaxim. 和升麻C. foetida L. 3种。升麻根茎主要含三萜皂苷、有机酸和色原酮类化合物。一般认为升麻有机酸是其有效成分,并以所含的阿魏酸、异阿魏酸为指标控制质量[ 1～4 ] 。近年来研究发现升麻所含的环菠萝蜜烷型三萜皂苷具有抗肿瘤、抑制核苷运转、调节内分泌等多种生理活性,也是其活性成分之一。升麻的临床应用以生片和蜜制片为主,有关升麻炮制研究非常少,本实验将以RP2HPLC法对升麻炮制前后有效成分阿魏酸、异阿魏酸和三萜皂苷272脱氧升麻亭(272deoxyactein)的含量进行测定,并探讨升麻炮制前后有效成分变化规律。 1　升麻炮制前后阿魏酸和异阿魏酸的含量测定 1. 1　仪器与试药 日本Jasco 系列HPLC 色谱仪: Jasco pump21580, Jasco UV21575 检测器, Jasco 工作站; 湘仪天平厂生产TG332A微量分析天平,昆山市超声仪器有限公司生产KQ2250B型超声波振动仪。乙腈色谱纯( Fisher公司出品) ,重蒸馏水自制,阿魏酸对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号077329910) ,异阿魏酸和272脱氧升麻亭为本课题组分离和结构鉴定, 经HPLC 法检测含量达98 。 1. 2　实验方法 1. 2. 1　色谱条件 色谱柱为YMC2Pack ODS2C18柱(4. 6 mm ×150mm, 5μm) ;乙腈2水2乙酸(15 ∶85 ∶0. 25)为流动相,流速0. 6 mL /min,柱温26 °C, 紫外检测波长320nm,进样量20μL,外标法定量。理论塔板数按阿酸峰计算,应不低于4 000。 1. 2. 2　溶液制备 对照品溶液制备　准确称取干燥至恒重的对照品阿魏酸2. 12 mg置2 mL 量瓶中,用80 甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀即得1. 06 mg/mL 阿魏酸贮备溶液;另再准确称取干燥至恒重的对照品异阿魏酸2. 08 mg置2 mL 量瓶中,用80 甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀即得1. 04 mg/mL 异阿魏酸贮备溶液。供试品溶液的制备　精密称取干燥的升麻样品粉末0. 5 g,置三角瓶中,加入50 mL甲醇,摇匀,于80 °C水浴上回流提取40min,过滤,滤渣用20 mL甲醇洗涤3次,合并滤液,回收甲醇,提取物用80甲醇定容至2 mL量瓶,摇匀,即得。 1. 2. 3　测定法 精密吸取阿魏酸和异阿魏酸贮备液80 μL 和160μL置2 mL量瓶,用80 甲醇定容至刻度,即为阿魏酸和异阿魏酸稀释溶液。用微量进样器精密吸取供试品溶液和对照品稀释溶液各20 μL 注入HPLC仪,外标法定量，得到对照品、样品HPLC色谱图,测定结果见表1。 表1　升麻炮制前后有效成分含量测定 药名 产地 类别 阿魏酸含量 异阿魏酸含量 27脱氧升麻亭含量 （㎎／g） (㎎／g） (㎎／g） 升 甘肃 生药