组织培养期末复习.doc

组织培养的概念： 是指用无菌方法使植物体的离体（in vitro）器官、组织和细胞在人为提供的条件下生长和发育的所有培养技术的总称。 脱分化： 将已分化的不分裂的静止细胞，放在培养基上培养后，细胞重新进入分裂状态。一个成熟的细胞转变为分生状态的过程叫脱分化。 再分化： 经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下可转变为各种不同的细胞类型，形成完整植株的过程。 细胞全能性： 植物体的每一个具有完整细胞核的细胞都具有该物种全部遗传的物质，在一定条件下具有发育成完整植物体的潜在能力。 组织培养植株再生的途径： 体细胞胚胎发生途径（胚状体发生途径）； 器官发生途径。 体细胞发生途径： 是指在组织培养中起源于一个非合子细胞，经过胚胎发生和胚胎发育过程（经过原胚、球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚5个时期），形成具有双极性的胚状结构，而发育成再生植株的途径。 培养类型： 按照外植体的不同，分为植株培养、胚胎培养、器官培养、细胞培养和原生质体培养5种类型。 继代培养： 培养物在培养基上生长一段时间以后，由于营养物质枯竭，水分散失，以及代谢产物的积累，必须转移到新鲜培养基上培养,这个过程叫做继代培养。 植物组织培养的特点： 培养条件可以认为控制、生长周期短，繁殖率高、管理方便，利于工厂化生产和自动化控制。 植物组织培养的应用领域： 快速繁殖、种苗脱毒、远缘杂交、基因工程、体细胞无性系变异和新品种培育、单倍体育种、种质保存、生物制品。 组织培养在农业上的应用 快速繁殖优良苗木；获得脱毒苗；育种上应用；工厂化育苗。 实验室的设计规则： 便于隔离、便于操作、便于灭菌、便于观察。 实验室的组成： 准备室、缓冲室、无菌操作室、培养室。 培养基的主要成分： 水、无机盐、有机物质、天然复合物、凝固剂、植物生长调节剂 无机元素的生理作用： （1）组成各种化合物，成为结构物质； （2）构成特殊物质，参与代谢； （3）维持离子平衡、胶体稳定及电荷平衡等电化学作用； （4）影响形态发生和组织、器官的建成等。 有机化合物的生理作用： 碳源；维持培养基渗透压。 维生素： 在细胞里主要是以各种辅酶的形式参与多种代谢活动。 植物生长调节物质及作用： 生长素类：主要被用于诱导愈伤组织形成；促进细胞脱分化；促进细胞伸长；促进生根。 细胞分裂素类：促进细胞分裂与扩大；诱导芽分化、促进侧芽萌发、使茎增粗、抑制茎伸长；抑制根分化。 赤霉素类：促进幼芽伸长生长，促进不定胚发育成小植株。 赤霉素和生长素协同作用，对形成层的分化有影响：当生长素／赤霉素比值高时有利于木质部分化，比值低时有利于韧皮部分化。 常用的培养基： MS培养基：它是1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。是目前应用最广泛的培养基。 White培养基：1943年由White为培养番茄根尖而设计的。特点：无机盐浓度较低，适于生根培养。 N6培养基：1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养而设计的。特点：是成分较简单，KNO3和（NH4）2SO4含量高，不含钼。在国内已广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花粉和花药培养。 B5培养基:是1968年由Galmborg等为培养大豆根细胞而设计的。特点：是含有较低的铵盐，较高的硝酸盐和盐酸硫胺素。 KM—8P培养基:它是1974年为原生质体培养而设计的。特点：是有机成分较复杂，它包括了所有的单糖和维生素。 消毒灭菌方法： 消毒:是指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用。 灭菌:是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体，即把所有生命的物质全部杀死。 湿热灭菌法：在密闭的蒸锅内，其中的蒸气不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在108kPa的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸气温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。 过滤灭菌法：一些生长调节剂(赤霉素、玉米素)、某些维生素是不耐热的，常用过滤灭菌-细菌过滤器方法。防细菌滤膜网孔的直径为0.45μm以下，可阻止细菌细胞和真菌的孢子通过。 外植体的选择标准： 种质优良、植株健壮、取材的最适宜时期、适宜的大小。 外植体成苗途径： 外植体→愈伤组织→根、芽→试管苗 外植体→胚状体→试管苗（胚状体途径） 外植体→根、芽→试管苗（器官发生途径） 常见污染及防治： 真菌污染、细菌污染； 防治措施： 减少或防止材料带菌 (2)外植体灭菌要彻底(3)玻璃器皿和金属器皿的灭菌(4)布质制品的灭菌(5)无菌室的消毒 (6)操作人员一定要严格按照无菌操作的程序进行接种。 外植体的褐变： 是指外植体在培养中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类物质，有时使整个培养基变褐，从而抑制其他酶的活性，影响材料的培养。 试管苗的