药典微生物检验培训内容.ppt

2010版药典微生物检验培训内容原有：无菌检查法微生物限度检查方法灭菌法新增：微生物限度检查法指导原则防腐剂效力检查法指导原则药品微生物实验室规范指导原则药品微生物检验替代方法验证指导原则补充：全封闭式无菌检测系统和无菌隔离技术的应用及其验证总则：环境、设备、人员培养基：品种、制备、灭菌、贮存、适用性检查稀释液、冲洗液：品种、制备、灭菌方法验证试验：直接接种法、薄膜过滤法供试品的无菌检查：供试品的处理、对照试验、直接接种法、薄膜过滤法、培养及观察结果判断无菌检查法培养基适用性检查包括：无菌性检查灵敏度检查灵敏度检查菌种：不得超过5代菌液：浓度100cfu/ml接种：2管+菌液，1管空白结果判断：+菌液——生长良好空白——无菌生长菌种和菌液制备菌液制备操作步骤接种（表格）接种（图示）How：按供试品的无菌检查法04What：供试品是否有抑菌性采取消除抑菌性的方法03Why：确认供试品无抑菌活性或已被消除01When：建立检查方法原检验条件改变产品组分发生改变02方法验证试验供试品有无抑菌性22%梯度加入培养基40%重点：验证直接接种法操作流程（表格）操作流程（图示）所有含供试品的管生长良好→供试品无抑菌作用→可以用直接接种法任一含供试品的管生长微弱、缓慢或不生长→供试品仍有抑菌作用→解决方法（目的：消除抑菌活性）扩大培养基用量、薄膜过滤法或其他01不管采用什么方法，都要进行验证！02结果判断：验证直接接种法重点：02梯度加入冲洗液01供试品有无抑菌性验证薄膜过滤法操作流程（表格）操作流程（图示）所有含供试品的容器生长良好→供试品无抑菌作用→可以用直接接种法任一含供试品的容器生长微弱、缓慢或不生长→供试品仍有抑菌作用→解决方法（目的：消除抑菌活性）增加冲洗量、增加培养基用量、使用中和剂、更换滤膜品种等等01不管采用什么方法，都要进行验证！02结果判断：验证薄膜过滤法验证中和法原理：加适量中和剂（可与前两种方法联合使用）重点：1、证明中和剂对试验菌无毒性2、梯度加入结果判断：所有含供试品的管生长良好→供试品无抑菌作用→中和剂对试验菌无毒性任一含供试品的管生长微弱、缓慢或不生长→供试品仍有抑菌作用→解决方法（目的：消除抑菌活性）增加中和剂用量、增加冲洗量/培养基用量、更换滤膜品种等等不管采用什么方法，都要进行验证！总则1检验量：最小包装单位2制备供试液：含抑菌成分3细菌、霉菌及酵母菌计数：平皿法、薄膜过滤法4控制菌检查：7种.供试液制备、增菌、分离、确认试验、结果判断5结果判断6稀释液7培养基8分类产品微限标准9微生物限度检查法要点：需用对照培养基（中检所）、回收率菌落形态大小应与对照培养基上结果判定：1、的菌落一致计数培养基的适用性检查计数方法的验证目的：考察供试液制备过程中微生物受影响的程度要点：至少应进行3次独立的平行试验试验菌种：同适用性检查验证方法：1、试验组(1)平皿法:1ml供试液+50～100cfu试验菌→倾注培养基(2)薄膜过滤法:规定量供试液+50～100cfu试验菌(最后一次冲洗时)→过滤→培养基2、菌液组3、供式品对照组4、稀释剂对照组结果判断：在3次独立的平行试验中(1)稀释组对照组的菌数回收率≥70%(2)试验组的菌数回收率≥70%(3)若试验组的菌数回收率70%，应采用其他方法或联合方法消除供试品的抑菌活性检查项目：促生长能力、指示能力、抑制能力结果判定：与对照培养基比较促生长能力——菌落大小、形态特征抑制能力——无菌生长指示能力——生长情况、指示剂反应控制菌检查用培养基的适用性检查要点：验证大肠菌群检查法用大肠埃希菌作为验证菌株方法：规定量供试液+50～100cfu试验菌→相应的控制菌检查法检出试验菌——该供试品可用此法未检出试验菌——消除供试品抑菌活性，重新验证结果判断：控制菌检查方法的验证抑菌剂（防腐剂）效力检查法指导原则为什么？——防止制