猪肝脏大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案.doc

猪肝脏大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案 (2011-06-27 18:19:02) 标签： 分类：工作学习 杂谈 实验原理： 1、 犬肠杆菌的性质： 大肠杆菌是G—无芽砲直杆菌，在大多数培养基上表现出不同的特性。在麦康凯琼脂平板 上是凸起光滑湿润的粉红菌落，革兰氏染色镜检为红色短杆菌。三糖铁琼脂上的反应为斜面 和底部都变黄，产气，不产生硫化氢。生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、山露醇、麦芽糖，不 发酵蔗糖。MR试验，删味试验为阳性，VP试验为阴性，不产生H2S,不能利用枸椽酸盐。 半固体中沿穿刺线向四周生长。 2、 沙门氏杆菌的性质: 沙门氏杆菌是G宜杆菌。在麦康凯平板上为细小半透明、圆形、无色小菌落，三糖铁斜 面卜?层变黄色，上层仍为红色，穿刺处为变黑产牛H$。能发酵葡萄糖产酸产气，能利用枸 椽酸盐，不发酵乳糖不利用蔗糖肌醇，MR阳性，VP阴性，不产卿味，不分解尿素。 实验材料： 含有大肠杆菌和沙门氏菌的猪肝脏、培养基（琼脂平板培养基、三糖铁琼脂斜而培养基、麦 康凯琼脂、生化培养基、SC）、器械（剪刀、记号笔、接种环、酒梢灯、显微镜、试管、玻 片、培养皿）、药品（消毒酒精、结品紫、碘液、酸洒精、品红、松柏油） 实验内容及操作程序: 一、 培养基制备： 制备普通琼脂培养基、麦康凯平板、SC增菌培养基、生化培养基，制备方法见附1. 二、 标本制备： （1） 取新鲜猪肝脏一小块，火焰表面消毒。 （2） 川浸过消毒液的剪刀剪开一个小口于消过毒的猪肝脏。 （3） 川接种环在剪开的肝脏小口沾取肝脏液，分别画线于麦康凯培养基和接种于SC中, 37° C恒温培养24小时。 菌种大肠杆菌 菌种 大肠杆 菌 菌落： 革兰氏染色: 三、 细菌分离培养： （1） 取出培养了24小时的麦康凯平板。挑选麦康凯平板上的凸起光滑湿润的粉红菌落染色 镜检，看是否为红色短杆菌，若是，即疑似为大肠杆菌，则取其接种于另一麦康凯平板，37° C 恒温培养24小时。 （2） 取出培养了24小时的SC增菌培养基,染色镜检,看是否有疑似沙门氏菌,有则取其 中细菌画线接种于麦康凯平板上，37° C恒温培养24小时。 四、 细菌的鉴定纯化： （1） 检查疑似大肠杆菌的培养基是否长满了粉红色菌落，染色镜检。并取其分别接种于生 化培养基上（葡?萄糖、乳糊、麦芽糖、甘露醇、蔗糊、肌醇、枸椽酸盐、尿素、MR、VP、 H$）,并做穿刺实验于三糖铁上。37° C恒温培养24小吋后观察结果。若实验结果满足预期 效果，则可判定为大肠杆菌，则将其接种于普通琼脂培养基上传代培养。 （2） 检查疑似沙门氏菌的平板上是否长满细菌，染色镜检，看是否满足于沙门氏菌的染色 特性。并取其接种于生化培养基上，并作穿刺实验于三糖铁上，37° C恒温培养24小时后观 察结果，若结果满足于沙门氏菌的牛化特性，则可判定为沙门氏菌，则将其接种于普通琼脂 培养基上传代培养。 实验的预期效果： 主耍牛物学特性和牛化特性 沙门氏菌菌落： 沙门氏 菌 菌落： 革兰氏染色: 糖发酵 葡萄糖 麦芽糖 蔗糖 乳糖 生化实 肌醇 M. R V. P 枸椽酸盐 验 二糖铁琼脂斜面变化: 菌体形态: 糖发酵 葡萄糖 麦芽糖 蔗糖 乳糖 生化实 肌醇 M.R V.P 枸椽酸盐 验 三糖铁琼脂斜而变化： （0表示产酸，Q表示产酸又产气） 菌种 主要生物学特性和生化特性 大肠杆 菌落： 菌 革兰氏染色： 菌体形态 糖发酵 葡萄糖 麦芽糖 蔗糖 乳糖 生化实 肌醇 M. R V.P 枸椽酸盐 验 三糖铁琼脂斜面变化: 沙门氏 菌落： 菌 革兰氏染色： 菌体形态： 糖发酵 葡萄糖 麦芽糖 蔗糖 乳糖 生化实 肌醇 M. R V.P 枸椽酸盐 验 三糖铁琼脂斜血变化： 实验记录： 时间人员安排: 附1. 【1】亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC） （1）原料 蛋白腺5g 乳糖4g 亚硒酸氢钠4g 磷 酸氢二钠5. 5g 磷酸二氢钾4. 5g L—胱氨酸0. Olg 蒸绸水1000ml （2）制法 称取L—胱氨酸0. lg （或DL—胱氨酸 0.2g）加4%氢氧化钠1.5ml,使其溶解，再加入蒸镭水 5ml即成1%L—胱氨酸氢氧化钠溶液。将除 亚硒酸钠和L-胱氨酸以外的各成分溶解丁-900ml蒸係水中，加热煮沸，待冷却后，以无菌操作与上 液混合，最后加入1%L—胱氨酸氢氧化钠溶液lml,分装于灭菌瓶中，每瓶100ml, PH应为7.0±0. 1。 （3）用途：用于沙门氏菌增菌培养。 【2】麦康凯培养基 （1）原料 琼脂 1. 5—2g 胆盐 0. 5g 蛋白豚 2g 1%中性红溶液 0.5ml 氯化钠 0.5g 蒸係水 100ml 纯乳糖 lg ⑵制法①将琼脂加于50ml蒸係水中, 加热溶解作为甲液。 ②另将蛋白豚、乳糖、氯化钠、胆盐置于50ml蒸馅水中，在水浴中加