实验二 线粒体和液泡的活体染色重点讲义.ppt

实验二 线粒体和液泡的活体染色 实验师：刘伟助教：史海丹 教师：赵红桃 关键词 活体染色 线粒体-詹纳斯绿B 液泡-中性红 人口腔粘膜上皮细胞 小麦根尖 洋葱内表皮 线粒体和詹纳斯绿B 液泡和中性红 注意事项 刮取活力好的口腔上皮细胞； 小麦根尖的压片，用镊子钝端轻轻按压； 小麦根尖液泡要观察分生区，液泡为初级小液泡，着色深，数量多； 染色时不可使染液干燥，应适当补充染液； 观察前，用吸水纸吸去四周溢出的染液； 先低倍镜，后高倍镜观察。 * * * 线粒体（Mitochondria） 呼吸作用 氧化反应 氧化状态呈现蓝绿色， 还原状态为无色。 詹纳斯绿B (Janus green B) 实验原理 线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态，呈蓝绿色; 而线粒体周围的细胞质中，这些染料为无色。 液泡 (Vacuole) 偏酸性环境 中性红 (neutral red) 弱酸性条件下呈现樱桃红色 实验原理 在中性或微碱性环境中，植物的活细胞能吸收中性红，排向液泡，在液泡偏酸 性的环境呈现樱桃红色。 詹纳斯绿B 室温 取口腔 上皮细胞 加入染液 15分钟 盖片， 显微观察 并绘图 中性红染液 取0.5cm左右 小麦根尖 放入染液 染色5分钟 吸走染液 加一滴 Ringer液 盖片压片 显微观察 并绘图 中性红染 色10 蒸馏水洗 蒸馏水中 压片观察 描述 自来水15 自来水中 压片观察 描述 KNO3中5 压片观察 酒精灯略微加热观察 描述 一、口腔上皮线粒体观察 二、小麦根尖分生区液泡系观察 三、洋葱表皮液泡观察 实验流程 3份 1份 活体荧光标记技术 荧光染料标记细胞器 线粒体：Mito Tracker Green 溶酶体：LysoTracker 高尔基体：Golgi-Tracker red 细胞核：DAPI，Hoechst 33342, 33258 内质网：ER Tracker 荧光蛋白（FP） 扩展知识 思考题 染线粒体时，为什么有的细胞的线粒体未被染色而细胞核却被染成了蓝色？ 染液泡时，为什么有的细胞的液泡未被染色而细胞质和细胞核却被染成了红色？ *