谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮同时测定 荧光免疫层析快速定量法.docx

谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮同时测定荧光免疫层析快速定量法

1.范围

本文件适用于稻谷、玉米、小麦、大豆等粮食及其加工产品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉

米赤霉烯酮快速同时定量检测。

2.规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括

所有的修改单）适用于本文件。

GB/T5491粮食、油料检验扦样、分样法

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T27404-2008实验室质量控制规范食品理化检测

LS/T6402-2017粮油检验设备和方法标准适用性验证及结果评价一般原则

3.术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4.原理

基于抗原抗体免疫性竞争结合的原理，待测定样本中如果含有DON、ZEN等待测抗原，则在层析涌动过程中会与结合垫上荧光微球标记的特异性单克隆抗体反应，抑制带有荧光标记物的抗体与固相在NC膜检测线上DON-BSA与ZEN-BSA固相物的结合。待测物中DON与ZEN含量不尽相同，结合于检测线上的荧光标记的抗体量也不同，相应的检测线上微球的荧光强度也有强弱。使用多通道时间分辨荧光免疫分析仪对检测线进行扫描，仪器将光信号转换为电压信号，经过放大输入到模拟数字转换器，将模拟信号转换为数字信号，通过读

数仪微处理器预置代码程序分别计算检测线T1、T2与C的荧光强度比值，结合标准定量

曲线即可一体式同步定量测定样本中DON与ZEN的含量。

5.材料和试剂

除另有规定，所有试剂均为分析纯及以上，水为GB/T6682规定的二级及以上水。

5.1脱氧雪腐镰刀菌烯醇/玉米赤霉烯酮一体式时间分辨荧光免疫层析定量卡（以下简称检测卡）：性能应满足附录A的要求，不同品牌不同批次的检测卡使用前，应按照附录A进行检

测卡性能测定。

5.210μg/mL脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准储备溶液。

5.31μg/mL玉米赤霉烯酮标准储备溶液。

5.4样品稀释液：由荧光检测卡配套提供，或根据产品说明书配制。

5.5提取液：甲醇水溶液（60:40，体积比）。

5.6离心管：50mL和1.5mL。

6.标准溶液配制

6.10.1μg/mL脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准溶液

准确吸取10μg/mL脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准储备溶液（5.2）100μL于10mL容量瓶中，

用水定容。4℃可保存3个月。

6.20.01μg/mL玉米赤霉烯酮标准溶液

准确吸取1μg/mL玉米赤霉烯酮标准储备溶液（5.3）100μL于10mL容量瓶中，用

水定容。4℃可保存3个月。

7.仪器和设备

7.1粉碎机：电机转速≥1000r/min。

7.2离心机：转速不低于4000r/min。

7.3分样筛：1mm孔径。

7.4天平：分度值0.01g。

7.5振荡器：转速≥2500r/min。

7.6计时器。

7.7多通道荧光免疫分析仪：在激发波长为365nm±5nm，检测波长为615nm±5nm条件下测定。

8.样品制备

8.1扦样与分样

按GB/T5491执行，在采样过程中，应防止样品污染，取代表性样品不少于500g。

8.2样品粉碎

用粉碎机（7.1）将被测样品粉碎至全部通过1mm分样筛（7.3），充分混合均匀。

8.3待测溶液制备

用天平（7.4）准确称取粉碎后的样品5.0g（精确到0.01g）于50mL离心管（5.6）中，加入20mL样品提取液。振荡提取1min～7min，振荡结束后，过滤或离心得上清液。取50μL上清液加入到450μL室温（25℃±2℃)下的样品稀释液（5.5）中，涡旋混合，即

为待测溶液。

注：不同厂家检测卡所用的样品制备方法可能不同，应按照产品使用说明中规定方法进行。

9.样品测定

9.1将检测卡（5.1）从冷藏状态（2℃~8℃)取出，室温平衡15min。

9.2仪器校准：选取测试项目为脱氧雪腐镰刀菌烯醇/玉米赤霉烯酮，准确移取100μL脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准溶液（6.1）和100μL玉米赤霉烯酮标准溶液（6.2）通过样品稀释液稀释10倍后，加到检测卡加样小孔中，室温孵育3min～10min后，将其放入荧光分析仪（7.7）

中，点击仪器主界面“测量”菜单中“标准测量”按钮，然后按“是”