GB/T 14926.52-2001实验动物　免疫荧光试验.pdf

ICS 65. 020. 30 , ... 、 844 E 目 中华人民共和国国家标准 GB/T 14926.52—2001 实验动物免疫荧光试验 Laboratory animal —Immunofluorescence assay (IFA) 2001-08-29 发布 2002-05-01 实施 雷家鶯星免盃佥謹恵胃发布 GB/T 14926.52—2001 .”台 、亠 刖 旨 本标准修订了 GB/T 14926. 18— 1994 《实验动物 淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒检测方法》中的免 疫荧光试验方法，将其作为一个独立标准列出。 本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。 本标准起草单位 ：中国实验动物学会。 本标准主要起草人：贺争鸣。 T 中华人民共和国国家标准 实验动物免疫荧光试验 GB/T 14926.52—2001 Laboratory animal —Immunofluorescence assay (IF A) 1范围 本标准规定了免疫荧光试验(IFA)所用试剂、器材和操作步骤等。 本标准适用于实验动物病毒抗体的检测。 2原理 含有病毒抗原的细胞(组织培养细胞或动物组织细胞)固定于玻片上，遇相应抗体形成抗原抗体复 合物 。此抗原抗体复合物仍保持其抗原活性,可与相应的第二抗体荧光素结合物结合 。荧光素在紫外 光或蓝紫光的照射下，可激发出可见的荧光 。因此,在荧光显微镜下以荧光的有无和强弱判定结果。 3主要试剂与器材 3. 1试剂 3. 1. 1抗原片的制备 将病毒接种于敏感细胞上(见表1),待细胞出现病变或确知细胞内含有丰富的病毒抗原后，用胰酶 消化下细胞，PBS洗涤三次,用适量PBS悬浮细胞,将细胞悬液滴于玻片孔中 。同吋消化未感染病毒的 同批细胞，滴加同一玻片另一孔内，作为正常细胞对照 。孔内滴加的细胞以细胞铺开、不重叠为宜 。室 温干燥后，冷丙酮(4 €)固定10 mino PBS漂洗后，充分干燥，置于一20C备用 。在一20C条件下可保 存一年。 3. 1. 2羊或兔抗小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、兔、犬或猴IgG异硫氤酸荧光素结合物，使用时用含0. 01%〜 0. 02%伊文思蓝PBS稀释至适当浓度。 3. 1.3阳性血清 用病毒抗原免疫清洁或SPF小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠或普通级兔、犬、猴所获得的抗血清 ；或自然感 染恢复后的犬、猴血清。 3. 1.4阴性血清 清洁或SPF小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠血清;或确认无相应病毒感染的兔、犬、猴血清。 3. 1.5 PBS(0. 01 mol/L,pH7. 4) 氯化钠 8 g 氯化钾 0.2 g 磷酸二氢钾 0.2 g 磷酸氢二钠(Na2HP()4 - 12H2O) 2. 83 g 蒸谓水 加至1 000 m 6 50%甘油 PBS 甘油 5 m PBS(0. 01 mol/L,pH7. 4) 5 m 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2001-08-29批准