转运体稳定表达的验证方法及其研究进展-中国现代应用药学.pdf

转运体稳定表达的验证方法及其研究进展 沈琦，胡海红，曾苏* (浙江大学药学院，杭州 310058) 摘要：目的 介绍验证转运体稳定表达的方法和技术，为转运体细胞模型的应用提供依据。方法 对近年来研究转运体 在细胞模型中稳定表达的相关文献进行综述。结果 实时定量PCR 及Western blot 是分别验证转运体转录水平和蛋白表 达的经典方法。结论 与荧光检测技术相结合的验证方法在转录水平、蛋白表达与功能活性等三方面都显示出广阔的应 用前景。 关键词：转运体；转录水平；蛋白表达；活性验证 中图分类号：R963 文献标志码：A 文章编号：1007-7693(2012)07-0603-07 Methods and Progress in the Study of Validating the Stable Expression of Drug Transporters * SHEN Qi, HU Haihong, ZENG Su (College of Pharmaceutical Sciences, Zhejiang University, Hangzhou 310058, China) ABSTRACT: OBJECTIVE To introduce approaches and techonologies for validating the stable expression of drug transporters in vitro, and provide suggestions for application in cellular models. METHODS Review related literatures about the recent research progress on stably expressing transporters in transfected cells. RESULTS Real-time polymerase chain reaction and 作者简介：沈琦，女，硕士 Tel: E-mail: njsq_314500@126.com *通信作者：曾苏，男，博士，教授 Tel: (0571 E-mail: zengsu@ 中国现代应用药学2012 年7 月第29 卷第7 期 Chin JMAP, 2012 July, Vol.29 No.7 ·603 · Western blot were classical methods respectively for detecting the expression of messenager ribonucleic acid (mRNA) and protein. CONCLUSION The combination of real time-PCR,Western blot with fluorescence detection techonology have promising applications in verifying the stable expression of transporter in different levels including transcription, protein expression and functional activity. KEY WORDS: transporters; transcription level; protein expression; activity assessment 转运体是分布于各种生物膜上具有转运内源 转运体研究不断深入，一般从转录水平、蛋白表 性和外源性化合物的一类蛋白，它会改变药物的 达水平和功能水平验证稳定高表达转运体模型的 吸收、分布、排泄过程，进而影响药物的治疗效 可靠性。考虑到验证手段的多样性同时为应用研 果。转运体主要分为 ATP 结合盒转运蛋白(