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VV凝集素（PHA）酶联免疫分析试剂盒实验原理

VV凝集素(PHA)酶联免疫分析试剂盒实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法

测定标本中VV凝集素(PHA)水平。用纯化的VV凝集素(PHA)抗体包被微孔

板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入VV凝集素(PHA)，再与

HRP标记的VV凝集素(PHA)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经

过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在

酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的VV凝集素(PHA)呈正

相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样

品中VV凝集素(PHA)浓度。标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相

关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20

℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根

过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标

准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相

同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50mu;l，待测样

品孔中先加样品稀释液40mu;l，然后再加待测样品10mu;l（样品zui终稀

释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混

匀。

 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将30倍浓缩洗涤液

用蒸馏30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔

加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标

试剂50mu;l，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：

每孔先加入显色剂A50mu;l，再加入显色剂B50mu;l，轻轻震荡混匀，37℃

避光显色10分钟.10.终止：每孔加终止液50mu;l，终止反应（此时蓝色立转

黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD

值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。VV凝集素(PHA)酶联免疫分析

试剂盒操作程序总结：

 计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲

线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标

准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入

方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板

开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析

出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用

加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间zui好控制在

5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲

线，zui好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔

的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui

后乘以总稀释倍数（乘以n乘以5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉

污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必

须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。VV凝集素(PHA)酶联免疫分析试剂盒保存

条件及有效期1．试剂盒保存：2-8℃。2．有效期：6个月

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