高效液相色谱使用常见问题 液相色谱如何操作.pdf

高效液相色谱使用常见问题液相色谱如何操

作

1.色谱柱中的流动相见排干吗？不少做色谱分别验的人碰到

过这样的情形：不慎未适时补充流动相，泵将溶剂瓶中的流动相吸

干了，HPLC系统由此而停止工作了。

1.色谱柱中的流动相见排干吗？

不少做色谱分别验的人碰到过这样的情形：不慎未适时补充流动

相，泵将溶剂瓶中的流动相吸干了，HPLC系统由此而停止工作了。

如此情况是否会损坏色谱柱？泵是否已将色谱柱中全部流动相都排

干了？色谱柱还能使用吗？事实上，假如泵将溶剂瓶中的流动相吸

干，并不会造成色谱柱的损坏。即使泵中充分了空气，泵也不会将

空气排入色谱柱。由于泵只能输送液体，而不能输送空气。相比之

下，另一个更可能发生的情况是忘掉盖上色谱柱两端的密封盖或盖

子太松而使色谱柱变干。同样，整个色谱柱干枯的情况不太简单发

生，多半可能只是色谱柱两端的几个毫米变干了，因挥发掉全部溶

剂是色谱柱变干需要相当长的时间。即使色谱柱真的变干了，也不

愿定就不可救药了。可以尝用一种完全脱气的、表面张力低的溶

剂（如经氮气脱气的甲醇）冲洗色谱柱以除去气体。较低的表面张

力有助于浸润填料表面；已脱气的溶剂应当能够溶解并去除滞留在

填料中的气体。色谱柱大约需要（以ImL/min的流速）冲一个小时

或更多的时间被彻底浸润，恢复到正常状态。

2.使用PEEKp（olyetheretherketone）管路和接头需要注意什么

问题？

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假如常常需要更改流路或更换不同品牌的色谱柱，使用PEEK材料制

成的管路和接头会特别便利。PEEK管路简单连接；PEEK接头不仅无

需工具，手拧即可固定，而且简单调整锥箍之外的管路长度，便利

与不同品牌或规格的色谱柱相连接。

使用此类材料的管路需要注意的是：PEEK对卤代烷烧和四氢哄喃的

兼容性不好。虽然未察看到上述溶剂溶解PEEK材料的明显迹象，但

PEEK碰到上述溶剂会变。另一个西药考虑的因素是压力限。不锈

钢管可耐受6000psi的压力，但PEEK管只能耐受近4000psi（但多

数HPLC应用系统压力不会超过3000psi）。

使用PEEK接头时则无需洼念接头耐溶剂性能，由于接头几乎或很少

与溶剂直接接触。但手拧固定的PEEK接头压力限低于不锈钢管，因

而压力太高时，可能会使接头在管路上滑动而产生死体积或漏液。

3.如何防备液相泵的故障:

要保持泵的良好操作性能，必需维护系统的清洁，保证溶剂和试剂的

质量，对流动相进行过滤和脱气.下面列出防备泵故障的几项措施：

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1）、用高质量试剂和HPLC级溶剂;

2）、过滤流动相和溶剂;

3）、脱气;

4）、每天开始使用时放空排气，工作结束后从泵中洗去缓冲液;

5）、不让水或腐蚀性溶剂滞留泵中;

6）、定期更换垫圈;

7）、需要时加润滑油;

8）、查阅有关泵操作手册中的其它建议。

处于良好操作状态的泵，应当能使色谱图上的基线平稳；保留时间

的重复性好。在等度洗脱时压力波动小于2%梯度洗脱时压力变化

o

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应是缓慢和平稳的。

为了使故障发生后尽快排出，平常应常备密封、单向阀（入口与出

口）、泵头装置、各式接头、保险丝等部件，以及更换工具。

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