信阳水牛PRL基因单核苷酸多态性与生长性状的-中国畜牧业协会.PDF

信阳水牛 PRL 基因单核苷酸多态性 与生长性状的相关性研究 1，2 1 1，3 1 1 马 云 ，王 伍 ，梁小娟 ，王 璐 ，李 芬 ，徐 源 ， 1 姚 瑾 （1.信阳师范学院生命科学学院，河南信阳 464000 ；2.华南师范大学生命科学学院，广东广 州 510631 ；3. 长江大学生命科学学院，湖北荆州 434023 ） 摘 要：本研究采用 PCR-SSCP 及 DNA 测序技术，以 50 头信阳水牛为材料，采集血 样，提取基因组 DNA ，以GenBank 公布的牛 PRL 基因（NC_007324 ）序列作为参照序列， 设计 PCR 引物，对 PRL 基因的第 2、4、5 外显子进行了变异检测，并且将其多态性与部分 生长性状进行了相关分析。结果表明：试验牛群体中，每一外显子的 PCR 扩增产物经 SSCP 分析均出现不同带型；测序结果表明：试验牛 PRL 基因第 2、4、5 外显子各存在 1 处 SNP （2974GA ，7581 GA ，8558 G - ）。统计分析结果表明：PRL 基因第 2 外显子 BB 型与 AA 型个体坐 骨端宽差异显著（P0.05 ），BB 型个体坐骨端宽显著宽于 AA 型个体。 关键词：信阳水牛；催乳素基因；PCR-SSCP ；SNPs ；生长性状 中图分类号：S823.3 文献标识码：A 引 言 信阳水牛是我国固有的优良水牛品种，也是我国动物生物多样性的重要组成部分。信阳 水牛以体型大，骨骼粗壮、结实，繁殖力较强，耐湿热，耐粗饲，性情温驯，抗病力、役用 能力较强，乳用性能良好而闻名于河南省内外，是产区内的优势畜种。在农业机械化水平低 的时期，信阳水牛是农业生产的主要动力，随着农业生产机械化程度提高和人们对优质牛奶 收稿日期：  基金项目：河南省科技厅科技攻关计划项目（102102110106）及河南省高等学校青年骨干教师（2008 ）资 助计划。  作者简介：马云(1974‐ )，男，宁夏平罗人，博士，副教授. 研究方向：动物生物技术。E‐mail:tmlf74@126.com  牛肉需求量的不断增加，开发水牛奶和牛肉选育乳肉兼用新型水牛已成为信阳水牛利用的必 然方向。因此，对其进行遗传改良，使其由使役性转向产肉、产奶型，尤其是产奶型，具有 重要意义。 催乳素（prolactin ，PRL ）主要由垂体的催乳素细胞分泌产生的[1] ，广泛分布于垂体以 [2] [3] 外的很多组织器官 。牛的PRL 基因被定位在 23 号染色体上 ，它由 5 个外显子和 4 个内 含子组成[4] 。PRL 基因对水牛的乳腺发育、泌乳和乳蛋白基因的表达有明显的调控功能，并 且 PRL 具有促进泌乳、维持黄体、分泌孕酮、促进前列腺及精囊的生长等作用。近年来， 经济性状功能基因的多态性研究已经成为动物遗传育种研究的热点之一，但对于信阳水牛催 乳素基因与生长性状的相关研究尚未见报道。本研究旨在从分子水平揭示 PRL 基因与信阳 水牛的生长性状是否存在相关性，为信阳水牛的分子育种提供理论参考资料。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 样本 血样采自河南省信阳光山、商城等地，共 50 头信阳水牛，对每头牛颈静脉采血 20mL ， ACD 抗凝（血液：ACD=6 ：1），置于-20℃保存，同时测量各项体尺指标。 1.1.2 主要试剂及实验设备 Tris 饱和酚、蛋白酶 K 购于郑州久是生物技术有限责任公司；10×PCR Buffer （Mg2+ free ）、dNTP Mixture、Mgcl2 、TaKaRa DNA Taq 酶购于 TaKaRa 宝生物工程有限公司；其 它试剂均为国产，主要购于郑州久是生物技术有限责任公司。PCR