教务处通知2002第045-中国农业大学植物保护学院.DOC

中国农业大学 本科生“URP”立项申请书 项目名称 葡萄座腔菌效应基因的敲除及功能 申 请 人 朱小琼 工作单位 植物保护学院 联系电话 电子信箱 mycolozhu@cau.edu.cn 填表日期 2017年4月13日 中国农业大学教务处制 项目名称 葡萄座腔菌效应基因的敲除及功能 项目起止时间 2017年4月—2018年4月 项目申请人情况 姓名 朱小琼 性别 女 出生日期 1978年7月 最后学历与学位 博士研究生 专业技术职务 讲师 从事专业 植物病理 项目概况 轮纹病是我国苹果生产中发生范围广、危害大的一种重要病害。该病不但引起生产中及储藏期的果实腐烂，造成严重产量损失，在病原物与植物互作的过程中，病原物需要突破植物的防御系统才能真正实现致病。pathogen-associated molecular patterns，PAMPs）介导的抗病反应（PAMP-triggered immunity， 实施计划及方案(明确各个环节对培养学生创新能力的具体思路及考核办法) 同源重组片段的获得 针对目的效应基因左右同源臂及潮霉素抗性标记设计引物； 利用Double-joint PCR方法扩增获得标记片段； 连接T载体； 转化大肠杆菌； 测序验证同源重组片段是否正确。 该环节可培养学生设计引物的能力，掌握Double-joint PCR、电泳、核酸定量、连接、转化等基本的实验方法。 考核方法：获得正确的同源重组片段 转化葡萄座腔菌 制备葡萄座腔菌的原生质体； 运用PEG介导的方法将1中获得的同源重组片段转化到原生质体中； 挑取转化子进行PCR验证 该环节训练学生制备真菌的原生质体、真菌转化及转化子的PCR验证等操作的能力。 考核方法：获得经PCR验证，正确敲除目的基因的转化子 转化子特性测试 每个基因选择3-5个敲除转化子，测试比较它们在菌落形态、生长速率、产孢量、孢子萌发等方面与野生型菌株的差异； 测试比较转化子对苹果叶片/果实的致病性。 该环节培养学生观察真菌生物学特性及致病性的能力。 考核方法：获得与野生型菌株相比有显著差异的转化子 三、项目实施的基础和条件 课题组已经筛选获得了能够抑制Bax诱导的烟草细胞坏死的候选效应子，目前正在进行同源重组敲除效应基因并对功能进行分析。课题组具备酶切、连接、转化等相关实验的技术和硬件设备，为本项目的开展提供了基础和保障。 四、学生提交的成果 结题报告； 详细、完整、清晰的试验记录； 五、经费预算 申请经费2000元，主要用于购买实验相关试剂及耗材。 六、学院URP领导小组意见 签字 （盖章） 月 日 1