《食品安全国家标准 食品中胆固醇的测定》编制说明.doc

《食品安全国家标准 食品中胆固醇的测定》 （征求意见稿）编制说明 标准起草的基本情况 （一）简要起草过程 根据《2014年食品安全国家标准制（修）订项目委托协议书》要求，标准起草小组自2014年6月起，依据标准制定程序和要求，查阅国内外的文献资料，对方法的技术参数进行了研制，按标准化工作导则编写标准检验方法和编制说明，并对本方法进行了验证。按照协议要求，于2015年6月底完成国家标准送审稿，按期提交。 （二）标准起草单位：湖北省疾病预防控制中心，北京市营养源研究所 （三）主要起草人：陈明、闻胜、何梅、洪婷、叶群、曹祥然、刘晓燕、聂晓明、李永刚、罗苹、张月晓、周妍、唐琳、王艳、刘潇。 标准的重要内容及主要修改情况 本标准是在GB/T 5009.128-2003 《食品中胆固醇的测定》，GB/T 22220-2008《食品中胆固醇的测定 高效液相色谱法》， GB/T 9695.24效液相色谱 《肉与肉制品胆固醇含量测定》的基础上，将其进行整合，本标准《食品安全国家标准食品中胆固醇的测定》检测范围涵盖所有食品，主要有三种检测方法：比色法、高效液相色谱法、气相色谱法。 （一） 试验方法的确定 通过实验研究，建立了食品中胆固醇的比色法，高效液相色谱法和气相色谱法。 比色法的主要内容为：当固醇类化合物与酸作用时，可脱水并发生聚合反应，产生颜色物质。因此可先对食品样品进行提取和皂化，使用硫酸铁铵试剂作为显色剂，在波长565 nm处测定吸光度，与标准系列比较定量，测定食品中胆固醇的含量。本方法使用范围由原来的“动物性食品”改为“肉类、蛋类等食品中”中胆固醇的测定，有利于该方法更精确的定量。脂肪的提取方法除 GB/T 5009.128-2003中所述之外，还另需酸水解法，以满足实际检测的需要。酸水解法适用于巴氏杀菌乳、灭菌乳、生乳中脂肪的提取。纯动物油脂无需经过脂肪的提取，可直接进行胆固醇的提取及测定。本方法对石油醚的沸程作了明确的规定，选用沸程为30～60℃的石油醚进行提取。 高效液相色谱法的主要内容为：样品经无水乙醇-氢氧化钾溶液皂化，石油醚和无水乙醇混合提取，甲醇溶解定量后，采用高效液相色谱仪检测，外标法定量。 气相色谱法的主要内容为：试样中的脂类经皂化后，胆固醇作为不皂化物被提取出来，用气相色谱法检测，外标法定量。 图1 胆固醇标准溶液色谱图（HPLC） 图2 胆固醇标准色谱图（GC） （二） 实验技术参数 1、方法的线性范围和检出限 配制一系列胆固醇的标准溶液系列，在方法规定的条件进行测定，胆固醇浓度-响应值的线性回归方程见表1。HPLC的检出限为0.64 mg/100 g,定量限为2.1mg/100 g。GC的检出限为0.06 mg/100 g,定量限为0.20mg/100 g。 表1胆固醇标准方法线性方程、相关系数和线性范围 方法 指标 测定含量（mg） 0.0 50.0 100.0 150.0 200.0 比色法 吸光度值 0 0.200 0.394 0.577 0.791 回归方程 y=3.918x+0.0006 R=0.9995 HPLC 测定浓度（μg/mL） 3.75 7.50 75.00 300.0 峰面积 18092.38 38973.37 408615.94 1653197.51 回归方程 y= -3.31×103x+5.52×103 R=0.9999 GC 测定浓度（μg/mL） 2.80 10.00 70.00 140.00 峰面积 27.26 100.61 688.49 1390.00 回归方程 y= 9.42x+15.17 R=0.9996 2、 方法的精密度和准确度 方法的精密度实验是通过分析两个胆固醇水平浓度样品，每个浓度平行测定6 次，计算相对标准偏差。本方法的精密度数据参见表2。 表2食品中胆固醇精密度试验数据（n=6） 方法 食品种类 样品浓度（mg/100g） 精密度（%） 1 2 3 4 5 6 比色法 炼猪油 73.8 67.3 62.1 62.7 69.7 67.9 8.13 猪前胛 116.0 114.9 117.3 114.2 118.5 118.6 1.59 HPLC 牛奶 14.17 13.88 13.99 13.98 15.19 15.09 4.14 猪肉 54.56 50.40 54.82 52.34 51.17 53.25 3.39 GC 牛奶 11.91 11.2 11.53 11.62 10.95 11.46 2.92 猪肉 65.43 61.78 62.37 64.75 61.97 63.65 2.42 选择样品进行高、中、低浓度的加标精密度试验，平行做3个样品，计算平均值及回收率，数据见表3。 表3样品加标试验结