shRNA下调abcb1基因逆转卵巢癌细胞多药耐药性的研究的开题报告.docx

shRNA下调abcb1基因逆转卵巢癌细胞多药耐药性的研究的开题报告

一、研究背景和意义

卵巢癌是女性生殖系统恶性肿瘤中最常见的一种，也是最致命的一种。目前，卵巢癌的治疗主要是手术切除和化疗，但由于卵巢癌具有多发性、复发性和耐药性等特点，迫切需要寻找新的治疗方法，以提高治疗效果和生存率。

多药耐药性是导致卵巢癌治疗失败的主要原因之一。在卵巢癌细胞的治疗中，药物“泵”（P-gp）对于多种抗癌药物的外排具有重要作用，通过降低药物在细胞内的浓度而导致化疗的失败。因此，寻找有效的方法抑制药物泵的功能，降低细胞的耐药性是卵巢癌治疗中迫切需要解决的问题。

RNA干扰技术（RNAi）是一种基于RNA的靶向基因表达调控技术，通过介导小干扰RNA（shRNA）或microRNA（miRNA）去下调特定基因的表达。本研究旨在应用RNA干扰技术下调abcb1基因的表达，探讨其对卵巢癌细胞多药耐药性的影响，为卵巢癌治疗提供新的理论与实践依据。

二、研究内容和方法

1.研究内容

本研究将采用体外实验的方法检测abcb1基因的表达对卵巢癌细胞多药耐药性的影响，主要研究内容包括：

（1）构建shRNA载体，转染卵巢癌细胞，检测abcb1基因表达的下调情况；

（2）采用Westernblot和实时荧光定量PCR对P-gp的表达进行检测，观察P-gp的蛋白和mRNA的表达变化情况；

（3）采用药物敏感性试验（MTT法）和流式细胞术检测不同分组的卵巢癌细胞对抗癌药物的敏感性和细胞周期的变化情况；

（4）通过实验证实abcb1基因和P-gp的在卵巢癌细胞多药耐药性中的作用机制。

2.研究方法

本研究将采用以下方法：

(1)设计特异性shRNA序列，并构建shRNA载体；

(2)转染shRNA载体到卵巢癌细胞中，检测abcb1基因表达的下调情况；

(3)采用Westernblot和实时荧光定量PCR对P-gp的表达进行检测，观察P-gp的蛋白和mRNA的表达变化情况；

(4)采用药物敏感性试验（MTT法）和流式细胞术检测不同分组的卵巢癌细胞对抗癌药物的敏感性和细胞周期的变化情况；

(5)进一步探讨abcb1基因和P-gp在卵巢癌细胞多药耐药性中的作用机制。

三、研究预期结果

通过本研究，预期可以得出以下结论：

（1）shRNA可以有效地下调abcb1基因的表达；

（2）下调abcb1基因的表达可降低卵巢癌细胞对抗癌药物的多药耐药性；

（3）下调abcb1基因的表达可以降低P-gp的表达，从而拮抗卵巢癌细胞多药耐药性。

四、研究进展计划

本研究将采用以下进展计划：

预计第一年，完成shRNA载体构建的优化、卵巢癌细胞体外转染、shRNA对abcb1基因表达下调效果的检测；

预计第二年，完成P-gp蛋白和mRNA表达检测、药物敏感性试验和流式细胞术的检测等实验；

预计第三年，在探讨abcb1基因和P-gp作用机制、撰写论文、开展学术展示等方面做出更深入的探讨。