嗜热玫瑰红球菌来源谷氨酰胺酶的重组表达与研究.docx

嗜热玫瑰红球菌来源谷氨酰胺酶的重组表达与研究

目录

内容概览．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3

1.1研究背景．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3

1.2研究意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

1.3文献综述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6

材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

2.1实验材料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9

2.1.1嗜热玫瑰红球菌菌株．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10

2.1.2质粒和宿主细胞．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12

2.2基因克隆与构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13

2.2.1目标基因的选择与克隆．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14

2.2.2载体构建与验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15

2.3重组蛋白的表达系统优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16

2.3.1表达载体的构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19

2.3.2诱导表达条件．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20

2.4重组蛋白的纯化与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21

2.4.1亲和层析纯化技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22

2.4.2酶活性检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22

嗜热玫瑰红球菌来源谷氨酰胺酶的性质分析．．．．．．．．．．．．．．．．．23

3.1酶的理化性质．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

3.1.1最适温度和pH值．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

3.1.2稳定性分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26

3.2酶的催化特性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27

3.2.1底物特异性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29

3.2.2动力学参数．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30

嗜热玫瑰红球菌来源谷氨酰胺酶的生物学功能研究．．．．．．．．．．．31

4.1生物学功能初步探索．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32

4.1.1对不同氨基酸的转化作用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33

4.1.2代谢途径分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33

4.2嗜热玫瑰红球菌来源谷氨酰胺酶的生物合成途径研究．．．．．．．．35

4.2.1关键酶的鉴定与功能分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37

4.2.2生物合成途径的调控机制．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38

嗜热玫瑰红球菌来源谷氨酰胺酶的应用前景．．．．．．．．．．．．．．．．．40

5.1工业应用潜力．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．40

5.1.1食品工业中的应用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42

5.1.2医药领域的应用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43

5.2环境影响评估．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．46

5.2.1环境友好性分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．47

5.2.2潜在的生态效应．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．