ET克隆的应用及Trim30基因敲除小鼠模型的初步建立的开题报告.docx

ET克隆的应用及Trim30基因敲除小鼠模型的初步建立的开题报告

1.研究背景和意义

ET（Enhancerofzestehomolog）是一种高度保守的调控蛋白，参与了表观遗传调控过程中的甲基转移、染色质修饰等，发挥重要的作用。研究表明，ET在某些癌症发生和发展中扮演着重要的角色。目前已经成功克隆了ET可能与癌症相关的基因，但是尚未深入探究其在癌症中的具体作用机制。因此，进一步研究ET的功能和机制对于揭示癌症发生的内部机制，探究潜在的癌症治疗靶点具有重要的意义。

同时，Trim30基因作为一种与打开染色质状态相关的因子，也在多种癌症中表现出重要的作用。通过基因敲除的方式，可以研究Trim30基因在肿瘤形成和发展中的作用机制，为癌症治疗提供新的策略。

2.研究内容

本研究的主要内容包括：

（1）ET的克隆和表达载体构建

参考已有的文献，采用RT-PCR技术，从人类细胞中分离出ET基因、建立线性ET表达载体，通过Westernblot、免疫荧光染色等方法检测其表达情况。

（2）探究ET在癌症细胞增殖和转移中的作用

将构建的线性ET表达载体和癌症细胞共同培养，通过MTT实验和转移实验，分析ET的表达是否影响细胞增殖和转移。

（3）建立Trim30基因敲除小鼠模型

采用CRISPR/Cas9技术，设计Trim30基因的靶位点并构建sgRNA，通过电转染方式将sgRNA和Cas9蛋白质导入到小鼠细胞中，建立Trim30基因敲除小鼠模型。

（4）探究Trim30基因在肿瘤形成和发展中的作用

将敲除Trim30基因的小鼠与正常小鼠进行比较，观察其形态学和生物学特征的变化，并通过组织学和免疫组化等方法，探究Trim30基因在肿瘤形成和发展中的具体作用机制。

3.研究方法

本研究使用了RT-PCR技术、Westernblot、免疫荧光染色等手段，分别用于分离ET基因、检测ET表达情况和分析ET的生物学功能。同时，采用CRISPR/Cas9技术，构建了Trim30基因敲除小鼠模型，并通过组织学和免疫组化等方法，探究其在肿瘤形成和发展中的作用。

4.研究预期成果

本研究的预期成果包括：

（1）成功克隆ET基因，建立线性ET表达载体，并探究其在癌症细胞增殖和转移中的作用。

（2）成功构建Trim30基因敲除小鼠模型，研究其在肿瘤形成和发展中的作用机制。

（3）探究ET和Trim30基因在癌症中的作用机制，为癌症治疗提供新的策略。