第二十二章 免疫学检测技术的基本原理.ppt

第二十二章 免疫学检测技术的基本原理 主要内容 抗原或抗体的检测 免疫细胞的检测 抗原抗体反应特点 抗原抗体反应的特异性 抗原抗体反应的可逆性 抗原抗体反应的可见性 抗原抗体比例合适 肉眼可见IC (凝集物，沉淀物） 往往采用人或动物的血清作为抗体来源， 体外的抗原抗体反应也称血清学反应。 经典的血清学反应： 凝集反应（agglutination reaction) 沉淀反应(precipitation reaction) 标记物标记技术 （一）凝集反应(agglutination)? 直接凝集反应 间接(被动)凝集反应 (二) 沉淀反应 概念：可溶性抗原与相应抗体结合，在 一定条件下形成沉淀物的现象。 可溶性抗原：血清蛋白、外毒素、 组织浸出液、细菌滤液等 类型： 1）单向琼脂扩散试验(singlel agar immunodiffusion) 2）双向琼脂扩散试验(double agar immunodiffusion) 3）对流免疫电泳（counter immunoeletrophoresis) (三) 免疫标记技术 利用荧光素、酶、放射性核素等标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应。 三大标记技术： 1）免疫酶测定(enzyme immunoassay, EIA) 酶联免疫吸附试验(ELISA）? 2）免疫荧光技术(immunofluorescence technique) 3）放射免疫测定法(radioimmunoassay, RIA) 1. 酶免疫测定 用酶标记抗体进行的抗原抗体反应，通过酶作用于底物后显色来判断结果。 抗原抗体反应＋酶促反应 酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA） 将已知抗原或抗体吸附在固相载体表面，再用酶标抗体进行检测的抗原抗体反应。 特点：敏感性高（ng-pg），操作简便 类型： 直接法(双抗体夹心法): Ab +Ag + Ab* 间接法: Ag +Ab + 抗Ab* 第二节 免疫细胞功能的检测 免疫细胞的分离 免疫细胞的功能测定 一、免疫细胞的分离 外周血单个核细胞 T、B细胞的分离与鉴定 磁珠分离法 荧光激活细胞分选仪分离法 （流式细胞术，FCM) 外周血单个核细胞 二、免疫细胞功能的测定 （一） T细胞功能测定： (1)T 细胞增殖(转化)试验： （2）皮肤试验 皮肤试验（结核菌素试验） （二） B细胞功能测定 (1) 单向琼脂扩散试验等测定Ig的含量 (2) 抗体形成细胞测定 溶血空斑形成试验 第二十三章 免疫学防治 （四）新型疫苗 亚单位疫苗： 提取病原体有效的免疫原成分制成的疫苗。 霍乱亚单位疫苗 合成肽疫苗： 用人工合成多肽抗原连接适当载体与佐剂 制成的疫苗。 猪口蹄疫合成肽疫苗 基因工程疫苗：利用DNA重组技术制备的只含保护 性抗原的纯化疫苗。HBsAg疫苗 人工被动免疫制剂 抗毒素 人免疫球蛋白制剂 单克隆抗体 细胞因子 两类免疫方法的比较：? 人工免疫的种类 自动免疫 被动免疫 输入物质 抗原 抗体  免疫力 出现的时间 1-4周后 立即 免疫力 维持时间 数月-数年 2-3周  用途 预防 治疗或 紧急预防 主动免疫 被动免疫 (一) 灭活疫苗