2017整理传染性法氏囊病卵黄抗体效价的测定.ppt

技能训练10 传染性法氏囊病卵黄抗体效价的测定 掌握鸡传染性法氏囊病卵黄抗体效价的测定方法 氯化钠、琼脂粉、培养皿、打孔器、酒精灯、鸡蛋、96孔血凝板、微量移液器、烧杯、带盖瓷盘、注射器、生理盐水、蒸馏水、标准抗原等 方法步骤 （一）1%琼脂平板制备 （二）稀释卵黄 （三）加样 （四）反应 （一）1%琼脂平板制备 1. 制板： 用8～10%氯化钠溶液配制1%琼脂溶液，电炉加热使之充分溶化后，倒入直径90 mm培养皿，制成厚度为2.5～3mm琼脂平板；平置，在室温下冷却凝固后打孔。 2. 打孔： 在琼脂板上按7孔一组的梅花形打孔（中间1孔，周围6孔），孔径5mm，孔距2～5mm，将孔内的琼脂用8号针头斜面向上轻轻将琼脂挑出，勿伤边缘或使琼脂层脱离皿底。一般打孔两组。 3. 封底： 用酒精灯轻烤平皿底部至微烫，封闭孔底部，以防侧漏。 4. 编号： 在平皿底用蜡笔编号，第一组编号1～6，第二组编号7～12。 （二）稀释卵黄 先用微量移液器在96孔血凝板加生理盐水，每孔50微升，共加1~12孔；再于第一孔加50微升卵黄，倍比稀释至12孔。 （三）加样 中央孔加入传染性法氏囊病病毒标准抗原，加样量以“满而不溢”为原则。用微量移液器小心的将96孔血凝板中不同浓度卵黄液小心加至琼扩板的周边孔上，血凝板孔号与琼扩板孔号要一一对应，加样从低浓度开始加样，每加一个浓度，吸嘴尽量喷干净 （四）反应 将琼扩板静置1～2min，加盖、倒置入湿盒中，放入37℃的温箱中24～48h。 （五）结果判断 24～48h后，观察出现白色沉淀线的卵黄稀释度，即是IBD抗体效价。 课后作业 1.写出实习报告； 2.掌握IBD卵黄抗体的检测方法。 * * 实训目标 仪器设备