DB21∕T 2395-2015 稻瘟病菌无毒基因检测 PCR法.pdf

ICS 65.020.01 B 04 DB21 宁 省 地 方 标 准 DB21/T 2395 2015 稻瘟病菌无毒基因检测 PCR 法 2015 - 05 - 18 发布 2015 - 07 - 18 实施 辽宁省质量技术监督局 发 布 DB21/T 2395 2015 前 言 标准按照GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 标准由辽宁省农业科学院提出。 标准由辽宁省农村经济委员会归口。 标准由辽宁省农业科学院创新中心负责起草。 标准主要起草人：郑文静、陆晓春、王世维、赵家铭、马丽、丛玲、张丽霞、白春明、王春语、王妍、 朱振兴、李丹、王平、李金红等。 标准由辽宁省农业科学院创新中心负责解释。 I DB21/T 2395 2015 稻瘟病菌无毒基因检测 PCR 法 1 范围 本标准规定了检测稻瘟病菌（Magnaporthe grisea ）无毒基因的检测方法，包括原理、 器设备、 试剂及样品、防污染措施、实验步骤及结果分析。 本标准适用于稻瘟病菌中无毒基因AVR1-CO39、AVR-Pia、AVR-Pii、AVR-Pik、AVR-Pita 和AVR-piz-t 的检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版 适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 19495.2 转基因产品检测 实验室技术要求 3 术语及缩略语 下列术语及缩略语适用于本标准 3.1 正向引物：处于DNA 双链上游的引物，简称F 引物。 3.2 反向引物：处于DNA 双链下游的引物，简称R 引物。 3.3 内参引物：在聚合作用起始时，可以刺激合成另一种大分子，并与反应物以共价键形式连 的序 列。 3.4 DNA ：Deoxyribonucleoside tripHospHate ，脱氧核糖核酸。 3.5 TE ：Tris-Cl、EDTA 缓冲液。 3.6 TBE ：Tris-Cl、硼酸、EDTA 缓冲液。 3.7 PrimeSTAR HS DNA Polymerase：高保真DNA 聚合酶。 3.8 PrimeSTAR Buffer （5×）: 5×PCR 反应液。 3.9 dNTP ：Deoxyribonucleoside tripHospHate ，脱氧核苷三磷酸。 3.10 PCR ：Polymerase chain reaction。 1 DB21/T 2395 2015 3.11 bp ：Base pair ，碱基对。 3.12 Goldenview ：核酸染料，替代溴化乙锭。 3.13 DNA Marker ：标准分子量的核酸标记。 3.14 bp: Base pair, 碱基对。 3.15 Tris ：tris(hydroxymethyl)aminomethane，三羟甲基氨基甲烷。 3.16 EDT