酵母菌死活细胞鉴别.ppt

 酵母菌细胞的形态观察、  死活细胞的鉴别 一、目的和要求 1、观察酵母菌细胞的形态结构； 2、掌握鉴别酵母菌细胞死活的染色原理和方法； 二、基本原理 1．形态观察：酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，通常比常见细胞大几倍甚至十几倍。大多数酵母菌以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。 2．死活鉴定：美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型呈无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。 具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则成蓝色或淡蓝色。 三、器材 1、菌种：酵母菌2d的培养斜面或平皿； 2、溶液和试剂：吕氏碱性美蓝染液； 3、仪器和其他用品：酒精灯，载玻片，盖玻片，显微镜，接种环，滴管等。 四、操作步骤 1、滴加一滴0.1%吕氏碱性美蓝热染液于载玻片中央，无菌操作用接种环由酵母菌培养斜面上挑取少许菌体置于染液中，混合均匀；（不要过于剧烈，以免破坏细胞） 2、用镊子取一块盖玻片，将盖玻片一边与菌液接触，缓慢将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上；（不要产生气泡） 3、将制片放置3min后，用低倍镜及高倍镜观察酵母菌形态和出芽情况，并根据细胞颜色区分死活细胞； 4、染色30min后再次观察，注意死活细胞比例是否发生变化； 5、用0.05%吕氏碱性美蓝染液作为对照同时进行上述实验。（建议做，用等量生理盐水稀释染液即可） * * 酵母出芽