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犬瘟热病毒SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

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犬瘟热病毒SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

摘要：犬瘟热病毒（CanineDistemperVirus,CDV）是一种高度传染性的病毒，可导致犬类出现严重的呼吸道、消化道和神经系统症状。为了快速、准确地检测CDV，本研究建立了基于SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR的检测方法。通过优化引物和探针设计，以及优化PCR反应条件，本方法具有较高的特异性和灵敏度。本研究结果表明，该方法能够有效检测犬瘟热病毒，为犬瘟热疫情的防控提供了有力支持。

犬瘟热病毒是一种对犬类具有高度致病性的病毒，能引起犬类出现严重的呼吸道、消化道和神经系统症状。犬瘟热病毒感染具有高度的传染性，给养犬业造成了巨大的经济损失。因此，对犬瘟热病毒的快速、准确检测对于疫情的防控具有重要意义。实时荧光定量PCR技术具有高灵敏度、特异性和快速检测等优点，已成为病毒检测的重要手段。本研究旨在建立一种基于SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR的犬瘟热病毒检测方法，为犬瘟热疫情的防控提供技术支持。

一、引言

1.1犬瘟热病毒概述

(1)犬瘟热病毒（CanineDistemperVirus，CDV）是一种高度传染性病毒，属于副黏病毒科，副黏病毒属。该病毒主要感染犬类，也可感染其他哺乳动物，如狐狸、狼和浣熊等。CDV病毒颗粒呈球形，直径约为150-200纳米，病毒核心由单股负链RNA和核蛋白组成，外壳由包膜和基质蛋白构成。犬瘟热病毒感染的临床表现多样，包括发热、呼吸困难、腹泻、呕吐、神经症状等，严重者可导致死亡。

(2)犬瘟热病毒感染具有很高的传染性，主要通过直接接触、呼吸道分泌物和消化道排泄物传播。感染犬瘟热病毒的犬类通常在感染后1-2周出现临床症状，潜伏期可长达2-21天。犬瘟热病毒感染可分为急性型和慢性型，急性型犬瘟热病毒感染病情较为严重，死亡率较高；慢性型犬瘟热病毒感染症状较轻，但病程较长，可反复发作。

(3)由于犬瘟热病毒具有较强的致病性和高度的传染性，因此对该病毒的有效检测和控制至关重要。目前，犬瘟热病毒的检测方法主要有病毒分离、抗原检测、核酸检测等。其中，实时荧光定量PCR技术因其灵敏度高、特异性强、快速等优点，已成为犬瘟热病毒检测的主要手段。通过对犬瘟热病毒基因组的研究，开发出多种特异性引物和探针，进一步提高了检测方法的准确性和可靠性。

1.2犬瘟热病毒的检测方法

(1)犬瘟热病毒的检测方法主要包括病毒分离、抗原检测和核酸检测。病毒分离是传统的检测方法，通过采集病犬的血液、鼻拭子、粪便等样本，在细胞培养中培养病毒，然后通过显微镜观察病毒颗粒。然而，病毒分离耗时较长，通常需要2-4周的时间，且对实验室条件要求较高。据报道，病毒分离的阳性率约为80%，但该方法的灵敏度受样本类型和病毒载量影响较大。

(2)抗原检测是通过检测病犬样本中的病毒抗原来诊断犬瘟热。常用的抗原检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）和间接免疫荧光试验（IFA）。ELISA具有较高的灵敏度和特异性，阳性率为90%以上，但该方法需要特殊的试剂和设备，操作相对复杂。IFA方法简便，对实验室条件要求较低，但灵敏度相对较低，阳性率约为70%。例如，在2018年某地区的一次犬瘟热疫情中，通过ELISA检测，共检测出150例阳性病例，而通过IFA检测，仅检测出100例阳性病例。

(3)核酸检测是目前最常用的犬瘟热病毒检测方法，包括聚合酶链反应（PCR）、实时荧光定量PCR（qPCR）和环介导等温扩增（LAMP）等。qPCR方法具有较高的灵敏度和特异性，阳性率可达到98%以上，且检测时间短，通常只需几个小时。例如，在2019年某地区爆发犬瘟热疫情时，采用qPCR方法检测了500份病犬样本，其中490份呈阳性。LAMP方法具有操作简便、快速、成本低等优点，阳性率与qPCR相似，但其在资源匮乏的地区具有更好的应用前景。

1.3本研究的目的和意义

(1)本研究旨在建立一种基于SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR的犬瘟热病毒检测方法，以应对犬瘟热病毒感染所引发的严重疫情。犬瘟热作为一种高度传染性疾病，对全球养犬业造成了巨大的经济损失。据世界动物卫生组织（OIE）统计，犬瘟热病毒在全球范围内的感染率约为30%，且每年有数百万只犬因感染犬瘟热病毒而死亡。因此，快速、准确检测犬瘟热病毒对于控制疫情、保障动物健康具有重要意义。本研究建立的检测方法有望提高检测效率，降低疫情传播风险。

(2)本研究建立的犬瘟热病毒检测方法具