硒化兰州百合多糖的制备及其抗炎作用研究.pdf

摘要

摘要

肺炎是由细菌、病毒和支原体等致病因子引起的呼吸道感染性疾病。目前治疗

肺炎的药物主要有激素类、抗生素类、抗病毒类和其它辅助类，但存在副作用大、

易产生耐药性等缺陷。天然产物因其安全、副作用小而备受关注。硒元素与人类健

康密切相关，多种植物多糖及其含硒衍生物均具有提高免疫力、抗病毒和抗炎等生

物活性。兰州百合（Liliumdavidiivar.unicolor）是西北特色资源植物，其多糖含量

丰富。课题组前期研究表明兰州百合多糖（Liliumdavidiivar.unicolorpolysaccharide，

LLP）具有抗氧化、降血糖、增强免疫等生物学活性，但其在肺炎预防和治疗方面

的研究还未见报道。

本研究制备了硒化兰州百合多糖（SelenizedLiliumdavidiivar.unicolor

polysaccharide，SeLLP），构建细胞炎症模型和肺炎小鼠模型评价了SeLLP体内外

的抗炎活性，初步探究了SeLLP对炎症细胞和肺炎小鼠的保护作用及机制，主要

研究结果如下：

1.经过水提醇沉及DEAE纤维素柱纯化得到兰州百合多糖（含量为93.71±

1.24%），采用硝酸-亚硒酸钠法制备出了硒化兰州百合多糖（硒含量为1721±3.49

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μg/g）。通过红外光谱分析得出SeLLP中存在Se=O和C-O-Se特征吸收峰；C核

磁谱证实硒取代了LLP的C6位；GC-MS法分析了单糖组成及摩尔比，结果显示

LLP及SeLLP均由葡萄糖和甘露糖组成，摩尔比分别为1:1.57和1:0.81；体积排

阻色谱与多角度激光光散射联用仪（SEC-MALLS）测定得到重均分子量（Mw）分

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别为1.052×10g/mol和8.171×10g/mol。

2.构建RAW264.7、A549和MRC-5细胞炎症模型，评价了LLP、SeLLP及无

机硒化合物（NaSeO）对模型细胞的预防保护作用及体外抗炎效果。结果表明，

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SeLLP对三种细胞均具有显著的预防保护作用及体外抗炎效果，且效果优于LLP

和NaSeO。CCK-8法测定细胞活力表明，SeLLP高剂量（100μg/mL）组能显著

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提高RAW264.7、A549和MRC-5细胞的活力。酶联免疫吸附法（ELISA）测定细

胞炎症因子水平可知，SeLLP高剂量组能显著降低炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6

的水平，且在25~100μg/mL范围内呈剂量依赖性。

3.构建脂多糖（LPS）诱导的肺炎小鼠模型，从组织水平和分子水平探究了LLP

和SeLLP对肺炎小鼠的预防保护作用及机制。结果表明，SeLLP能在转录水平和

翻译水平同时调控TLR4/MyD88/NF-κB途径中的关键基因和蛋白发挥抗炎作用，

I

摘要

并且SeLLP的抗炎效果优于LLP，呈剂量依赖性。测定肺组织W/D可知，SeLLP

能显著减轻肺炎小鼠肺水肿程度，SeLLP高剂量（400μg/mL）组肺组织W/D明显

下降；HE染色观察小鼠肺组织病理切片表明，SeLLP能减轻肺炎小鼠肺组织损伤，

减少炎性细胞浸润；免疫组织化学结果显示SeLLP能显著地减弱TNF-α、TLR4、

NF-κBp65和MyD88在肺组织中的表达；qRT-PCR结果显示SeLLP高剂量组能显

著下调肺炎小鼠肺组织中的TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-κBp65、TLR4和MyD88基

因表达；WB结果显示，SeLLP高剂量组对肺炎小鼠肺组织中的TLR4、NF-κBp65

和TNF-α蛋白表达具有显著下调作用。

综上所述，本论文提取及分离纯化出兰州百合多糖，制备了硒化兰州百合多糖，

对比