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PP2Ac介导Smad3中间区去磷酸化促肾间质纤维化研究的开题报告

题目：PP2Ac介导Smad3中间区去磷酸化促肾间质纤维化研究

一、研究背景及意义

肾间质纤维化是慢性肾脏病最终阶段的共同病理过程，是导致慢性肾脏病患者进入晚期的重要因素。肾间质纤维化的形成过程涉及多种细胞和分子机制的相互作用，如细胞外基质蛋白沉积、基质金属蛋白酶活性受抑制、以及各种褐垢细胞的转化增生。其中，Smad3信号通路在肾间质纤维化中扮演重要角色。

PP2A是一种蛋白质磷酸酶，能够去除Ser/Thr蛋白激酶所致的肌动蛋白磷酸化，维持其原始构象。我们的实验室之前的研究发现，PP2A能下调Smad3的底物水平，从而阻止肾间质细胞的纤维化。而且，PP2A的表达水平在肾间质纤维化的小鼠模型中也有明显的升高。

在Smad3分子中，具有磷酸化修饰的中间区域对于其功能至关重要。因此，了解PP2A介导Smad3中间区的去磷酸化作用，有助于我们进一步认识肾间质纤维化的分子机制，也将为其治疗提供新的靶点。

二、研究内容及方法

1.研究内容

本研究将采用小鼠肾小管上皮细胞（mTECs）作为实验模型，通过过表达或敲除PP2A对Smad3中间区的影响进行研究。具体内容如下：

（1）构建PP2A过表达或敲除的mTECs。

（2）利用免疫荧光法或Westernblot检测mTECs中PP2A、Smad3中间区磷酸化程度的变化。

（3）利用qRT-PCR、免疫印迹等方法检测Smad3下游的纤维化相关基因（如COL1A1和ACTA2）的表达水平的变化。

2.研究方法

（1）构建重组的pLenti-CMV-GFP-PP2Ac表达载体，将其导入到mTECs中，使其过表达PP2A。另外还将通过siRNA敲除PP2A。

（2）Westernblot或免疫荧光法检测Smad3中间区磷酸化程度的变化。

（3）qRT-PCR检测COL1A1和ACTA2的表达水平。

三、研究预期结果及意义

我们预计，通过过表达或敲除PP2A的方式，能够观察到Smad3中间区的磷酸化程度的变化。进一步地，研究将证实PP2A介导Smad3中间区去磷酸化对肾间质纤维化的影响。最终，该研究将为开发肾间质纤维化的新的治疗靶点提供依据。