附件薄层色谱法.pptx

1TLC法鉴别

2色谱鉴别法概念是利用药物在一定色谱条件下，产生特征色谱行为（比移值或保留时间）进行鉴别试验，通过比较色谱行为和检测结果是否与药品质量标准一致来验证药品真伪的方法。

31906年，俄国植物学家Tswett发表了他的实验结果，他为了分离植物色素，将植物绿叶的石油醚提取液倒入装有碳酸钙粉末的玻璃管中，并用石油醚自上而下淋洗，由于不同的色素在碳酸钙颗粒表面的吸附力不同，随着淋洗的进行，不同色素向下移动的速度不同，形成一圈圈不同颜色的色带，使各色素成分得到了分离。

4常用的色谱鉴别方法色谱鉴别法常用的色谱鉴别方法薄层色谱法（TLC）高效液相色谱法（HPLC）纸色谱法(PC)气相色谱法（GC）

5薄层色谱法（TLC）定义薄层色谱法是将适宜的吸附剂或载体涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层，在同一块薄层板上点加供试品和对照品，在相同条件下展开，显色剂显色，检出色谱斑点，对比供试品与对照品的色谱图进行定性鉴别。

6薄层色谱法（TLC）吸附薄层色谱的分离原理点在薄层板上的样品不断地被吸附剂吸附和被展开剂溶解而解吸，并随展开剂向前移动，从而产生差速迁移得到分离。同一种药物在同样条件下的薄层色谱行为是相同的,依此可以鉴别药物及其制剂的真伪。

7薄层色谱法（TLC）比移值Rf最佳范围0.3～0.7可用范围0.2～0.8

8薄层板及固定相涂布器点样器展开箱显色与检测仪器仪器与材料薄层色谱法（TLC）

9薄层板具有一定机械强度、化学惰性、耐一定温度、表面平整、厚度均匀，价格合理，常用为玻璃板。玻璃板的常用规格：5cm×20cm、10cm×20cm、20cm×20cm，要求光滑、平整、洗净后不附水珠、干燥。仪器与材料薄层色谱法（TLC）

10仪器与材料固定性吸附剂硅胶硅胶H、硅胶HF254硅胶G、硅胶GF254硅胶活性强弱与含水量有关，水分越高活性越低，吸附力越小活化105～110℃加热30′氧化铝酸性、中性和碱性聚酰胺表面有酰胺基，可与酚、羧酸、氨基酸等形成氢键硅胶G(含粘合剂煅石膏)，GF254(含254nm荧光剂)，硅胶H(不含粘合剂)，硅胶HF254薄层色谱法（TLC）

11涂布器有手工、半自动、全自动薄层涂布器仪器与材料薄层色谱法（TLC）

12点样器材常用微升毛细管或手动、半自动、全自动点样器仪器与材料微升毛细管全自动点样器手动点样器薄层色谱法（TLC）

13展开箱上行展开可用适合薄层板大小的专用平底或双槽展开缸，展开时须能密闭；水平展开用专用的水平展开缸。仪器与材料薄层色谱法（TLC）

14显色与检测仪器显色有喷雾法及浸渍法仪器与材料喷雾瓶薄层色谱法（TLC）

15操作方法制板供试液及对照液的制备点样展开显色与检视薄层色谱法（TLC）

16（1）制板市售薄层板：临用前，110℃活化30min聚酰胺薄膜不用活化自制薄层板操作方法一份固定相研磨混匀涂布器三份水（或含有黏合剂的水溶液）自然干燥用前活化薄层色谱法（TLC）

17（2）点样操作方法注意：点样时勿损伤薄层表面薄层色谱法（TLC）

18（3）展开展开剂的制备：新鲜配制展开：点样后的薄层板放入加有展开剂的层析缸中，密闭，一般上行展开，薄层板浸入展开剂深度一般要求溶剂最初的前沿距原点约5mm，展开至规定展距后立即将薄层板取出，晾干，以备检测。展距：一般8～15cm，高效板5～8cm操作方法预吸附中展开中薄层色谱法（TLC）

19（4）显色与检视操作方法喷雾显色法荧光显色法荧光淬灭斑点日光检视紫外光365nm或254nm下检视薄层色谱法（TLC）

20薄层色谱的显色方法一看、二照、三碘、四显，荧光背景也常见A:首先在日光下观察，划出有色物质的斑点位置B:在紫外灯下观察有无暗斑或荧光斑点C:大部分有机物会吸附碘可逆的产生棕色或黄色斑点。D:荧光薄板检测，观察荧光薄板中出现的暗斑。E:既无色又无紫外吸收的物质，可以用显色剂显色薄层色谱法（TLC）

21将正品防风供试液，习用品防风供试液及对照药材供试液各5μl，点于同一20cm×10cmMerckSG60F254预制板上。以氯仿-甲醇(6∶1)展开两次后，于254nm紫外灯下观察