复方白毛夏枯草对慢性支气管炎抗炎作用的实验研究_李海峰.pdf

DOI:10.13288/j.11-2166/r.2009.s1.226 中医杂志2009 年 12 月 第 50 卷 增刊 241 使酒精在室温挥发干净。 GATCTGGATGTCATCACTGGCTGTGTC 测序反应条件 成分 引物 ATTGCTCTAATAGGGTCTTTCTCTGCCAAGACAGCAAGGT : BigDye(2.5x) 8µl, (10µmol /L) 1µl, 灭菌去离子水 11µl ，总体积 20µl 。反应条件 96 ℃ 1min →(96 GACAGAGA ℃ 10 →50℃ 5 →55℃ 4min)x35 个循环→4 ℃保温。 LHR产物测序图谱： 测序产物电泳：电泳前进行产物纯化，采用酒精/NaAC 纯 CGTCGTCATCTGTGCTTGCTGCATTAGGATCTACTTTGCA 化方法。在 PCR 仪上变性:94℃ 5min ，4 ℃10min 后，上机电泳。 GTTCAAAATCCAGAGCTGACAGCTCCTAAGAAGGACACA 仪器自动灌胶至毛细管，1KV 预电泳 5min，按编程自动进样， AAAATTGCTAAGAAGATGGCCATCCTCATCTTCACAGACT 再预电泳(lKV，25min) ，在 7.5KV 下电泳 2h 。每个样品电泳总 TCACGTGCATGGCGCCCATCTCTTTCTTTGCCATCTCGGCT 时间为2.5h 。电泳结束后仪器自动分析出彩色测序图谱。 GCCTTCAAAGTGCCCCTTATCACTGTCACCAACTCGAAAA 1.2.3 FSHR 、LHR 的免疫组织化学 SABC 法 SD 大鼠术前 TCTTACTGGTCCTTTTTTATCCTGTCAATTCTTGTGCCAAT 晚禁食不禁水, 10%的水合氯醛溶液按0.3ml/kg 大鼠体重腹腔注 CCATTTCTGTATGCGATCTTCACGAAGGCGTTTCAGAGAG 射麻醉 取出肾脏组织立即放入 多聚甲醛 ℃浸渍固定 ATTTCCTTCTGCTGCTGAGCCGATTCGGCTGCTGTAAACG , 4 % 4 24h ，用石蜡包埋后将组织蜡块切成 4 mm 的切片 ,并将切片贴 CCGGGCGGAGCTTTACAGAAGGAAGGAATTTTCTGCATA 附于 APES 处理过的载玻片上 ,烘干备用。FSHR 免疫组化ABC TACTTCCAACTGCAAAAATGGCTTCCCAGGAGCAAGTAA 染色程序 ①将切片进行二甲苯脱蜡 先后各 无水乙醇 GCCGTCCCAGGCTACCCTGAAGTTGTCCACAGTGCACTGT : , 10min, 5 min,30g/L 甲醇-H2O2 室温 20min ; ②5 % BSA 室温作用 CAACAGCCCATACCACCGAGA 25min ; ③EDTA ,pH 8.0 或 0.01 mol/L 枸橼酸盐缓冲液进行热 3 讨论 修复抗原 ④一抗兔抗