2种神经肽在奶山羊下丘脑中的共存.pdf

维普资讯 安徽农业科学。Journal AnhuiA ．Sci．2007。35(18)：5452—5453，5455 责任编辑 孙红忠 责任校对 李洪 2种神经肽在奶 山羊下丘脑 中的共存 林磊 ，蒋田园，陈树林 ，李文献2，郑毛亮 ，赵慧英 ，范光丽，李颖 (I．西北农林科技大学动物科技学院，陕西杨凌 712100；2．河南省乳品工程技术研究中心，河南郑州 450008) 摘要 为了探~j．-TYr-脑中促性腺激素释放激素(0删 )和催产素(or)在同一细胞有无共存的现象，实验采用免疫组化链霉素抗生物素 一 过氧化物酶法对GnRH与0T免疫反应物在妊娠周期奶山羊下丘脑的分布进行双重酶标记研究。结果显示，在室旁核、视上核、视前 交叉上核、弓状核、下丘脑外侧区、乳头体内侧核、乳头体后核等 18个核团(区)有GnRH一0T双标记免疫反应阳性细胞。阳性细胞的形状 有圆形、卵圆形、多角形；有的阳性细胞突起明显。根据细胞 中阳性物质的多少和核团中阳性细胞数量，可分为强阳性、中等阳性、弱阳 性核团 GnRH与 在上述核 团的某些细胞的共存现象为GnRH与crr在功能上的相互调节提供 了形态学依据。 关键词 促性腺激素释放激素；催产素；下丘脑；妊娠奶山羊；免疫组化sP法 中图分类号 Q789 文献标识码 A 文章编号 o5l7—6611(2OO7)培一05452—02 促性腺激素释放激素 (Gor~adotropinreleasinghormone， 下用过氧化物酶阻断液(试剂 A)孵育40nfin；用 0．O1mol／L GrlRH)是动物生殖过程中最重要的激素之一 ，是 由9种不同 PBS液(DH值 7．4)漂洗 3次，每次 10min，切片入非免疫动物 的氨基酸残基组成的十肽。1971年，Shal1)等J首先从猪的 血清(试剂B)，室温下孵育40rain；入第一抗体(鼠源性 单 下丘脑分离并提纯得到 GrlRH。Gnthq除对垂体内卵泡刺激 克隆抗体、兔源性 GnRH多克隆抗体，工作浓度分别为 1： 素和黄体生成素的分泌有强大调节作用外，还对多种组织和 5Off)，l：500，武汉博士德公司产 品)，室温孵育 24～48h。 器官的正常功能具有调节作用 ，如性腺 、肾上腺皮质和大脑 0．O1mol／LPBS液(DH值7．4)漂洗3次，每次 10rain；OT染色 组织等。催产素(Oxytocin，(JT)是下丘脑中最早被发现并阐 程序：加生物素标记的第二抗体(试剂 c )，室温下孵育 1．5 明结构的神经肽 ，由9个氨基酸组成。OT除对生殖活动的 h；用0．Olmol／LPBS液(1)H值 7．4)漂洗3次，每次 10min；加 调节发挥重要作用外，对 t2血管功能、消化功能、体液渗透 链亲合素一过氧化物酶溶液 (试剂 DOT)，室温下孵育 1．5h 压 、神经免疫和体温等也有调节作用 ，并与应激反应 、学习记 (所用 A、B、c、D液为福州迈新公司生产 sP试剂盒)；0．O1 忆、睡眠与觉醒、痛觉调制 、动物的行为活动等有密切关系。 mol／LPBS液(1)H值7．4)漂洗3次，每次 l0min，入 DAB显色 在生殖功能上 GnRH和 ()T密切相关 ，二者共 同作用于下丘 液呈色，显色时间为40min左右，蒸馏水洗2遍终止反应后， 脑一垂体 一性腺轴。在功能上，GnRH和 (还可调节与性腺 PBS液洗2遍。接着进行 GnRH染色程序：加生物素标记 的 活力长期相关 的过程 ，包括有丝分裂、蛋白合成释放和细胞 第二抗体 (试剂C(R¨H)，室温下孵育 1．5h；用0．0lmol／LPBS 分化 。OT可通过刺激 N0释放而促进下丘脑内侧的G，删 液(pH值 7．4)漂洗 3次，每次10min；~Jg链亲合素 一过氧化物 释放l引。诸多的生理功能的研究表明，GnPffl和0T在一定程 酶溶液(试剂 D(；RH)，室温下孵育 1．5h；0．O1mol／LPBS液 度上可相互调节。而生理功能的产生必定有其形态学基础 ， (pU值7．4)漂洗3次，每次 10min，入 AEC显色液呈色，