抗肿瘤药物阿霉素对细胞增殖及凋亡的影响.docx

抗肿瘤药物阿霉素对细胞增殖及凋亡的影响冯景（201111201028）张书（201111201036）指导老师：张伟摘要：为了探究抗肿瘤药物阿霉素对细胞增殖及凋亡的影响，使用了MTT比色法测定了细胞给不同浓度后的相对数量，研究其对细胞增殖的影响；使用荧光染色法研究其对细胞形态的影响，并观察细胞凋亡形态。关键字：阿霉素 细胞凋亡 MTTAbstract：To explore the anticancer drug doxorubicin effect on cell proliferation and apoptosis, studying its effects on cell proliferation by the MTT that analyzes the relative number of cells after different concentrations; learning its affect on cells morphology using fluorescence staining and apoptotic morphology was observed.Keywords: Apoptosis doxorubicin MTT近50年的抗肿瘤药物研究开发工作使肿瘤化疗取得相当的进步，特别是使血液系统恶性肿瘤患者生存时间明显延长，但严重威胁人类生命健康的占恶性肿瘤90%以上的实体瘤的治疗尚未达到满意的疗效。抗肿瘤药物正从传统的非选择性单一的细胞毒性药物向针对机制的多环节作用的新型抗肿瘤药物发展。目前发现许多天然药物具有抗肿瘤作用，部分常用的抗肿瘤药物及其作用机制如表1所示，其中很多抗肿瘤药物可以明显抑制肿瘤细胞的增殖，而对正常细胞的毒副作用较小。表1.部分常用的抗肿瘤药物及其作用机制药物名称作用机制药物名称作用机制Actinomycin D（更生霉素）抑制RNA的合成Glucocorticoids（糖皮质激素）激素Adriamycin（Doxorubicin，阿霉素）DNA嵌入剂5-Fluorouracil（ 5-氟尿嘧啶）抗代谢药物Bleomycin (博来霉素)引起DNA片断化Hydroxyurea（羟基脲）抗代谢药物Camptothecin（喜树碱）拓扑异构酶I型药物Mitoxantrone（米托蒽醌）DNA嵌入剂Chlorambucil（苯丁酸氮芥）DNA交联剂Paclitaxel(TAXOL) (紫杉醇)靶向微管药物Cisplatin（顺铂）DNA交联剂Staurosporine（星形孢菌素）激酶抑制剂Cytarabine（阿糖胞苷）抗代谢药物Tamoxifen（它莫西芬）激素拮抗剂Cycloheximide (放线菌酮)蛋白质合成抑制剂Topotecan（拓扑替康）拓扑异构酶I型药物Cyclophosphamide（环磷酰胺）DNA交联剂Vinblastine（长春碱）靶向微管药物材料和方法实验材料生物材料人胃癌细胞BGC-823试剂MTT母液(5mg/mL)、裂解液（10%SDS—0.01N HCl）、胰酶、PBS溶液、PI 、Ho.33342、阿霉素。阿霉素：是一种抗肿瘤抗生素，可抑制RNA 和DNA的合成，对RNA的抑制作用最强，抗瘤谱较广，对多种肿瘤均有作用，属周期非特异性药物，对各种生长周期的肿瘤细胞都有杀灭作用。主要适用于急性白血病，对急性淋巴细胞白血病及粒细胞白血病均有效，一般作为第二线药物，即在首选药物耐药时可考虑应用此药。PI（碘化丙啶）：是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测，它是一种溴化乙啶的类似物，在嵌入双链DNA后释放红色荧光。尽管PI不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。Ho.33342 ：结合于DNA的AT碱基对，释放蓝色荧光,可进入活细胞,用于细胞周期的研究,染色体和细胞核的观察实验方法步骤取对数生长期的细胞,用胰酶消化计数,配制细胞悬液浓度为: 3-4×104/mL，取细胞接种到96孔板，每孔200μL，即8000细胞/孔。加药处理:待细胞贴壁后于第二天中午换液加药(可在24小时进行), 换200μL新鲜培养基，用无菌水配制相应浓度的药液（详细配置药液方法见表2），每个孔加入4μL配制后药液，作用72小时。表2.阿霉素浓度配制表　1246810阿霉素ul0.40.81.62.43.24无菌水ul39.639.238.437.636.836总体积ul404040404040图1.96孔板加样示意图测定: 取测定孔, 弃去培养基,加100μL 新鲜的培养基, 加12 μL MTT，8小时后加100μL裂解液。过夜后，用酶标仪测定OD值。将酶标仪测出的数据用SPSS软件进行分析，找出半数抑制浓度( IC50 )，IC50是指在用药