GB/T 23874-2009饲料添加剂木聚糖酶活力的测定　分光光度法.pdf

ICS 65. 120 B 46 OB 中华人民共和国国家标准 GB/T 23874—2009 饲料添加剂木聚糖酶活力的测定 分光光度法 Determination of xylanase activity in feed additives — Spectrophotometric method 2009-05-26 发布 2009-10-01 实施 发布 GB/T 23874—2009 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。 本标准由中国农业大学农业部饲料工业中心、武汉新华扬生物有限公司、广东溢多利生物技术股份 有限公司负责起草。 本标准主要起草人：陆文清、曹云鹤、刘兴海、詹志春、刘亚力、陈清华。 T GB/T 23874—2009 饲料添加剂木聚糖酶活力的测定 分光光度法 1范围 本标准规定了用分光光度法测定饲料添加剂中木聚糖酶的活力。 本标准适用于饲料添加剂木聚糖酶产品，最低检出量为10.0 U/go 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。凡是注日期的引用文件 ，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 木聚糖酶能将木聚糖降解成寡糖和单糖 。还原性寡糖和单糖在沸水浴条件下可以与3,5-二硝基 水杨酸(DNS)试剂发生显色反应 。反应液颜色的深度与酶解产生的还原糖量成正比 ，而还原糖的生成 量又与反应液中木聚糖酶的活力成正比 。因此，通过分光比色测定反应液颜色的强度，可以计算反应液 中木聚糖酶的活力。 在37 C、pH为5.50的条件下，每分钟从浓度为5 mg/mL的木聚糖溶液中降解释放1 mol还原 糖所需要的酶量为一个酶活力单位U。 4试剂与溶液 除特殊说明外，所用的试剂均为分析纯 ，水均为符合GB/T 6682中规定的二级水。 4. 1氢氧化钠溶液，浓度为200 g/L 称取氢氧化钠20. 0 go加水溶解，定容至100 mLo 4.2乙酸溶液，浓度为0. 1 mol/L 吸取冰乙酸0. 60 mLo加水溶解，定容至100 mLo 4.3乙酸钠溶液.浓度为0.1 mol/L 称取三水乙酸钠1.36 go加水溶解，定容至100 mLo 4.4乙酸-乙酸钠缓冲溶液，浓度为0. 1 mol/L,pH为5.50 称取三水乙酸钠23. 14g,加入冰乙酸1.70 mL0再加水溶解，定容至2 000 mL0测定溶液的pH。 如果pH偏离5. 50,再用乙酸溶液(4. 2)或乙酸钠溶液(4. 3)调节至5. 50。 4.5 木糖溶液(C5H10O5),浓度为 10. 0 mg/mL 称取无水木糖1.000 g,加乙酸-乙酸钠缓冲溶液 (4. 4)溶解，定容至100 mLo 4.6木聚糖溶液.浓度为100 mg/mL 称取木聚糖(Sigma X0627n)1.00 g,加人0.32 g氢氧化钠，再加入90 mL水，磁力