GB/T 15206-1994食品中胆固醇的测定方法.pdf

GB/T 15206—1994 中华人民共和国国家标准 食品中胆固醇的测定方法 Method for determination of cholesterol in foods GB/T 15206—1994 1 主题内容与适用范围 本标准规定了用分光光度计测定各类动物性食品中胆固醇的方法。 本标准适用于各类动物性食品中胆固醇的测定。 2 原理 当固醇类化合物与酸作用时，可脱水并发生聚合反应，产生颜色物质。因 此可先对食品样品进行提取和皂化，用硫酸铁铵试剂作为显色剂，测定食品中 胆固醇的含量。 3 试剂 全部试剂除注明外均匀分析纯，实验用水蒸馏水。 3．1 石油醚。 3．2 无水乙醇。 3．3 浓硫酸。 3．4 冰乙酸：优级纯。 3．5 磷酸。 3．6 胆固醇标准物质。 3．7 胆固醇标准液。 3．7．1 胆固醇标准储备液（1 mg/mL）：精确称取胆固醇 100 mg，溶于冰乙酸 中，并定容至 100 mL。此液至少在 2 个月内保持稳定。 3．7．2 胆固醇标准常备液（100μg/mL）：吸取胆固醇标准储备液 10 mL，用 冰乙酸定容至 100 mL。此液用时临时配制。 3．8 铁矾显色剂。 3．8．1 铁矾储备液：溶解 4.463 g 硫酸铁铵[FeNH (SO) ·HO]于 100 mL85% 4 4 2 2 磷酸中，贮于干燥器内，此液在室温中稳定。 3．8．2 铁矾显色液：吸取铁矾储备液 10 mL，用浓硫酸定容至 100 mL。贮于 干燥器内，以防吸水。 3．9 50%氢氧化钾溶液：称取 50 g 氢氧化钾，用蒸馏水溶解，并稀释至 100 mL。 3．10 5%氯化钠溶液：称取 5 g 氯化钠，用蒸馏水溶解，并稀释至 100 mL。 3．11 钢瓶氮气：纯度 99.99%。 4 仪器和设备 4．1 实验室常用设备。 4．2 721 型分光光度计。 4．3 电热恒温水浴。 4．4 电动振荡器。 4．5 具玻塞试管：体积 10 mL、25 mL。 5 操作步骤 5．1 胆固醇标准线 中华人民共和国卫生部中华人民共和国卫生部 1994—08—101994—08—10 批准 199批准 1994—08—104—08—10 实施 实施 GB/T 15206—1994 吸取胆固醇标准常备液 0.0、0.5、1.0、1.5、2.0 mL 分别置于10 mL 试管 内，在各管内加入冰乙酸使总体积皆达 4 mL。沿管壁加入 2 mL 铁矾显色液，混 匀，在 15～90 min内，在 560～575 nm 波长下比色。以胆固醇标准浓度为横坐 标，吸光度值为纵坐标做标准曲线。 5．2 样品测定 5．2．1 食品脂肪的提取与测定 根据食品种类分别用索氏脂肪提取法、研磨浸提法和罗高氏法提取脂肪。 并计算出每 100 g 食品中的脂肪含量。 5．2．2 食品胆固醇的测定 将提取的油脂 3～4 滴（约含胆固醇 300～500μg），置于 25 mL 试管内，准 确记录其重量。加入 4 mL 无水乙醇，0.5 mL50%氢氧化钾溶液，在 65℃恒温水 浴中皂化 1 h。皂化时每隔 20～30 min 振摇一次使皂化完全。皂化完毕，取出 试管，冷却。加入 3 mL5%氯化钠溶液，10 mL 石油醚，盖紧玻塞，在电动振荡 器上振摇 2 min，静置分层（一般约需 1 h 以上）。 取上层石油醚液 2 mL，置于 10 mL 具玻塞试管内，在 65℃水浴中用氮气吹 干，加入 4 mL 冰乙酸，2 mL 铁矾显色液，混匀，放置 15 min后在 560～575 nm 波长下比色，测得吸光度，在标准曲线上查出相应的胆固醇含量。 6 结果计算