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oIFN-tau在E.Coli中的可溶性表达及其活性的初步
研究的开题报告
一、研究背景
IFN-tau(Interferontau)是一种独特的促进发育的干扰素,在反应
母体子宫的免疫适应,同时还能刺激母体细胞对胚胎保留。IFN-tau对黄
体生成作用有调节作用,能实现分泌乳汁,保持胎盘和具有受精卵着床
的天然粘液中卵巢激素水平。因此,IFN-tau具有很高的应用价值。目前
IFN-tau主要从天然来源中提取,生成量少,易受环境影响。为此,使
IFN-tau快速、高效地得到大量表达就很关键。
二、研究目的
本研究旨在通过在大肠杆菌中表达IFN-tau,初步探讨IFN-tau的表
达情况、可溶性和活性情况,为后续的IFN-tau研究奠定基础。
三、研究内容
1.构建IFN-tau表达质粒。本实验将IFN-tau基因克隆进入
pET21a(+)表达载体中,获得IFN-tau表达质粒。
2.大肠杆菌中的表达和可溶性评估。转化表达质粒后,产生IFN-tau
表达大肠杆菌,并评估IFN-tau在大肠杆菌中的可溶性。
3.表达物的纯化与活性评估。采用Ni-NTA亲和柱纯化大肠杆菌中的
IFN-tau,然后进行活性评估。
四、研究方法
1.扩增IFN-tau基因并构建IFN-tau表达质粒。利用PCR扩增IFN-
tau基因,然后构建IFN-tau表达质粒。
2.大肠杆菌中的表达和可溶性评估。将表达质粒转化到大肠杆菌中,
定向诱导表达,并收获大肠杆菌。使用B-PER蛋白质提取试剂和超声波
处理对大肠杆菌细胞裂解,评估IFN-tau在大肠杆菌中的可溶性。
3.表达物的纯化与活性评估。采用Ni-NTA亲和柱纯化大肠杆菌中的
IFN-tau,然后进行活性评估。
五、研究意义
1.基于大肠杆菌的可溶性表达IFN-tau是获得大量IFN-tau的主要手
段,研究可以为大量生产提供思路和方法。
2.IFN-tau是一种重要的生物功能分子,其研究对于母胎医学和动物
医学等领域的发展有着深远的意义。
3.本研究为后续利用IFN-tau做进一步研究提供了基础条件和技术支
持。