《牛奶中7种大环内酯和硝基咪唑残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》文本.docx
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牛奶中7种硝基咪唑和大环内酯类残留量的测定液相色谱-串联
质谱法
1范围
本文件规定了牛奶中7种硝基咪唑和大环内酯类抗生素（甲硝唑、地美硝唑、洛硝达唑、林可霉素、阿奇霉素、替米考星、罗红霉素）的液相色谱-串联质谱检测方法。
本文件适用牛奶中7种硝基咪唑和大环内酯类的测定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4原理
试样经乙腈提取，分散固相萃取法净化，反相色谱柱分离，供液相色谱-串联质谱仪测定，基质匹配外标法定量。
5试剂和材料
本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。
5.1试剂
5.1.1乙腈：色谱纯。5.1.2甲酸：优级纯。
5.1.3无水硫酸钠：优级纯。
5.1.4十八烷基（C18）粉末：粒径50μm。
5.1.5N-丙基乙二胺（PSA）粉末：粒径50μm
5.1.60.1%甲酸水溶液：取甲酸（5.1.2）1.0mL，用水溶解定容到1000mL，摇匀。
5.1.70.1%甲酸乙腈溶液：取甲酸（5.1.2）1.0mL，用乙腈（5.1.1）溶解定容到1000mL，摇匀。
5.2标准品
7种硝基咪唑和大环内酯类标准品名称、化学分子式和CAS号见附表A。
5.3标准溶液配制
5.3.1标准储备液（1.0mg/mL）：分别准确称取7种硝基咪唑和大环内酯类标准物质适量，用乙腈
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（5.1.1）溶解并定容至10.0mL容量瓶中，避光冷冻贮存，保存期限为3个月。
5.3.2混合标准储备液（10.0μg/mL）：分别移取7种硝基咪唑和大环内酯类标准储备液100μL，混合后用乙腈（5.1.1）稀释并定容至10.0mL容量瓶中，避光冷冻贮存，保存期限为1个月。
5.3.3混合标准工作溶液：分别准确吸取不同体积混合标准储备液，用空白基质定容至1.0mL，配制成浓度为为1.0~200.0ng/mL的标准工作溶液，临用现配。
6仪器和设备
6.1液相色谱-串联质谱仪：配备电喷雾离子源。6.2天平：感量0.00001g和0.01g。
6.3涡旋混合器。
6.4高速离心机：最大转速9000r/min。6.5超声波清洗器。
6.6氮吹仪。
6.7有机微孔滤膜，孔径0.22μm，或相当者。
7分析步骤
7.1试样制备
取适量样品混合均匀，冷藏保存。
7.2试液的提取与净化
7.2.1试液的提取
称取5.0g样品于50.0mL具塞离心管中，加入乙腈（5.1.1）15mL、无水硫酸钠50g，高速匀浆3min，8000r/min离心5min，取上清液；残渣再加乙腈（5.1.1）15mL重复提取一次，合并上清液，用乙腈定容至50.0mL，待净化。
7.2.2试液的净化
移取10.0mL上清液至装有150mgC18（5.1.4）和50mgPSA（5.1.5）的高速离心管中，涡旋5min，8000r/min离心5min，取上清液于45℃氮吹至近干，初始流动相复溶至1.0mL，上清液过0.22μm有机滤膜，滤液供HPLC-MS/MS分析。
7.3仪器参考条件
7.3.1液相色谱参考条件
a）色谱柱：C18，2.1mm×150mm，粒径3.5μm或性能相当。
b）柱温：35℃。
c）流动相：A：0.1%的甲酸溶液（5.1.6），B：0.1%甲酸乙腈溶液（5.1.7）；梯度洗脱见表1。
d）流速：0.3mL/min。e）进样量：5μL。
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表1流动相及梯度洗脱条件
时间/min
流速/（mL/min）
流动相A/%
流动相B/%
0.00
0.3
95
5
5.00
0.3
95
5
5.01
0.3
65
35
10.00
0.3
65
35
10.01
0.3
40
60
13.50
0.3
40
60
13.51
0.3
95
5
15.00
0.3
95
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7.3.2质谱参考条件
a）电离方式：电喷雾离子源（ESI）。
b）扫描方式：正离子扫描。
c）检测方式：多反应监测（MRM）。
d）鞘气温度：325℃。
e）鞘气流速：10.0L/min。
f）雾化器压力：310.23kPa。
g）喷嘴电压：500V。
h）毛细管电压：3500V。
i）定性离子对、定量离子对、碎裂电压、碰撞能量等参数参见附录